NF-κB炎癥信號通路靶向封閉防治急性創(chuàng)傷性肺損傷的實驗研究.pdf

1、背景:國內外關于 ALI/ARDS的研究大多數集中于探討細胞因子網絡的失衡,盡管使用各種藥物針對細胞因子進行了大量的臨床防治,但始終沒有一種完全有效、可重復、有統計學意義的方法。ALI是一種炎癥免疫信號轉導紊亂引起的疾患。當機體受到創(chuàng)傷、休克等損傷時,肺是首先被攻擊的靶器官和細菌來源之一。而肺泡巨噬細胞是肺組織炎癥瀑布效應的激活點。核因子κB(NF-κB)是核轉錄調節(jié)蛋白的一種,具有多向調節(jié)的特點;參與多種炎性介質基因和及多種免疫相關基

2、因的轉錄和調控,是炎癥免疫反應中多個信號途徑的匯聚點。本課題組前期研究證實NF-κB的核移位是誘導炎癥基因表達的關鍵環(huán)節(jié),并在失控性炎癥反應(SIRS)和急性肺損傷(ALI)的病理機制中發(fā)揮關鍵作用。但目前拮抗 NF-κB活化通路、抑制炎癥損傷尚無特效藥物和成熟手段。
　　目的:為創(chuàng)傷性ALI篩選精確的基因藥物靶點,尋求一種高效、副作用小的炎癥靶向控制方法和尋求高效合理的治療方案提供實驗基礎和理論依據。
　　方法:本實驗運用

3、已成功建立的家兔ALI模型,選定NF-κB信號通路的關鍵環(huán)節(jié)為突破口,利用載體/藥物技術,對體內外炎癥效應細胞(如肺泡巨噬細胞)的NF-κB核移位識別目的基因κB序列的―瓶頸‖通路進行特異性靶向封閉;并用分子生物學、免疫學和形態(tài)學等方法證實靶向封閉炎癥信號通路、調控炎癥基因表達防治SIRS/ALI的可行性和有效性。
　　結果:體外實驗:脂質體轉染的雙鏈寡聚脫氧核苷酸(dsODNs)能有效降低肺泡巨噬細胞中炎癥介質 IL-1α、IL

4、-6、IL-10、TNF-α和 VCAM的mRNA表達和肺泡巨噬細胞培養(yǎng)液中 LDH的含量(P<0.01);dsODNs-decoy/脂質體為1:5時轉染效率最高,轉染6小時后細胞攝取率最高。為體內試驗的順利進行奠定了基礎。
　　體內試驗:雙鏈寡聚脫氧核苷酸(dsODNs-decoy)能有效減少肺組織的炎癥介質IL-1α、IL-6、IL-10、TNF和VCAM的mRNA表達,dsODNs-decoy組與對照組和錯配 dsODNs-

5、decoy組比較有統計學意義;血清 LDH檢測實驗組明顯減少(p<0.01);HE染色顯示對照組和錯配 dsODNs-decoy組中肺泡變形、融合,大小不一;掃描電鏡顯示對照組和錯配 dsODNs-decoy組肺泡隔增粗、增厚,肺泡隔不完整、斷裂。Western blot顯示 dsODNs-decoy組中 NF-κB p65核移位明顯減少。
　　結論:體外實驗中脂質體轉染 dsODNs-decoy具有較高的轉染效率,脂質體轉染的d