EGCG影響TNF-α誘導的NF-κB入核及促凋亡效應.pdf

1、目的:觀察表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)誘導人胃癌SGC-7901細胞凋亡,探討其作用機制是否與調節(jié)細胞核轉錄因子κB(NF-κB)入核有關。
　　方法:Hoechst染色法檢測SGC-7901細胞經EGCG處理前后凋亡形態(tài)學改變;采用10ng/ml腫瘤壞死因子-α(TNF-α)作為NF-κB入核誘導劑,應用Western Blot方法探討TNF-α對NF-κB入核影響,

2、同時Western Blot方法也用于觀察EGCG作用前后NF-κB蛋白在胞漿內及胞核內的變化;PI染色流式細胞術檢測EGCG調節(jié)NF-κB入核前后細胞凋亡率改變;DNA瓊脂糖凝膠電泳觀察EGCG誘導細胞DNA斷裂情況。
　　結果:Hoechst染色法顯示,EGCG處理后部分細胞呈現典型凋亡形態(tài)改變:核致密濃染或呈碎塊狀、蒼白色。Western Blot方法檢測發(fā)現,10ng/ml的TNF-α作為NF-κB入核誘導劑分別作用SGC

3、-7901細胞30、60、90、120min后,核內NF-κB/p65明顯增多并在60min時出現平臺期;60μg/ml的EGCG預處理細胞不同時間(0、12、24、36、48h)后,再以10ng/ml的TNF-α處理60min,檢測發(fā)現核內NF-κB明顯下降并在24h時出現平臺期;不同濃度EGCG(40、60、80、100μg/ml)預處理細胞24h后,再加10ng/ml的TNF-α處理60min,核內NF-κB呈濃度依賴性下降。流式

4、細胞術顯示,10ng/ml的TNF-α處理細胞60min后,細胞凋亡率為(3.73±0.15)％,60μg/ml EGCG處理細胞24h后,再以10ng/ml的TNF-α處理細胞60min,凋亡率為(16.63±0.15)%;NF-κB通路阻斷劑吡咯啉烷二甲基硫脲(Pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)100μmol/L預處理30min后再以10ng/ml的TNF-α處理細胞60min,細胞凋亡率為(21.4