抑郁癥患者細(xì)胞因子中性粒細(xì)胞活化肽(ENA78)水平及其與文拉法辛療效的相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的:盡管過去幾十年中,對(duì)于抗抑郁藥物的研究取得很大的進(jìn)展,然而抑郁癥病因仍不明確,其生物學(xué)標(biāo)記物至今仍難以確定。近年來(lái),相關(guān)研究表明中樞神經(jīng)免疫反應(yīng),尤其是細(xì)胞因子在抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,但由于活體腦組織取材不現(xiàn)實(shí),所以大部分抑郁癥的細(xì)胞因子水平研究主要聚焦于外周血的水平研究,希翼能找到抑郁癥的細(xì)胞因子生物學(xué)標(biāo)記物和可能的相關(guān)致病基因。然而到目前為止,關(guān)于抑郁癥的外周血細(xì)胞因子水平研究結(jié)果卻很不一致。找到一個(gè)與抑郁癥

2、的細(xì)胞因子生物學(xué)標(biāo)記物猶如大海撈針。隨著轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展及基因表達(dá)譜芯片技術(shù)的出現(xiàn),外周血表達(dá)譜芯片研究在腦組織取材困難的精神疾病當(dāng)中發(fā)揮著重要的作用,它能最小成本、快速、準(zhǔn)確、靈敏地發(fā)掘潛在的相關(guān)的候選基因。本研究擬通過全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)篩查出差異最為顯著的細(xì)胞因子,再經(jīng)過獨(dú)立大樣本驗(yàn)證該基因的差異表達(dá)。因?yàn)樽鳛樯飳W(xué)標(biāo)記物,外周血的血漿水平更易于測(cè)定,所以本研究同時(shí)研究該基因的血漿水平。進(jìn)一步為探討抑郁癥患者該血漿水平的改變是

3、狀態(tài)性抑或是特質(zhì)性,了解其是否隨著藥物治療而變化,故而在另一獨(dú)立樣本中研究文拉法辛對(duì)其血漿水平的影響及其血漿水平與文拉法辛療效的關(guān)系,同時(shí)再次驗(yàn)證抑郁癥患者與健康對(duì)照之間該血漿蛋白濃度的差異。
　　方法:(1)所有受試者均通過《DSM-Ⅳ-TR軸Ⅰ障礙定式臨床檢查病人版》(DSM-Ⅳ-TR axi sⅠ disorders-patient edition,SCID-I/P)定式診斷工具對(duì)患者進(jìn)行訪談。入組符合《美國(guó)精神疾病診斷手冊(cè)

4、》第4版修訂版(DSM-Ⅳ-TR)抑郁癥診斷標(biāo)準(zhǔn)的首發(fā)、未服藥的患者,評(píng)定漢密頓抑郁量表17項(xiàng)(Hamilton RatingSeale for Depression,HAMD-17);(2)對(duì)全基因組表達(dá)譜芯片研究中入組的抑郁癥患者及相匹配的健康對(duì)照各8例(樣本集1),抽取外周靜脈血提取總RNA進(jìn)行Affymetrix U133 plus2.0基因表達(dá)芯片檢測(cè),篩查出差異表達(dá)最為顯著的細(xì)胞因子;(3)采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(

5、Real-time quantitativereverse transcriDtase polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法,對(duì)樣本集1和獨(dú)立大樣本(樣本集2:首發(fā)、未服藥抑郁癥患者120例及相匹配的健康對(duì)照120例)驗(yàn)證該細(xì)胞因子基因的差異表達(dá);(4)同時(shí)對(duì)于這部分樣本采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,EIASA)研究該細(xì)胞因子的血漿蛋白濃度

6、;(5)探討該細(xì)胞因子的血漿蛋白濃度的變化可能是狀態(tài)性抑或是特質(zhì)性改變,故入組另一獨(dú)立樣本(樣本集3:首發(fā)、未服藥的抑郁癥患者64例及相匹配的健康對(duì)照64例),患者予文拉法辛單藥治療隨訪8周,研究其血漿蛋白濃度的變化。同時(shí)根據(jù)治療8周后的HAMD17減分率將患者分成有效組與無(wú)效組,研究該細(xì)胞因子血漿蛋白濃度與文拉法辛療效的關(guān)系,及治療前該細(xì)胞因子血漿蛋白水平與文拉法辛療效的關(guān)系。同時(shí)也在這一樣本集中再一次驗(yàn)證抑郁癥患者與健康對(duì)照之間該血

7、漿蛋白濃度的差異。
　　結(jié)果:(1)全基因組表達(dá)譜芯片研究(樣本集1)結(jié)果顯示,抑郁癥患者與正常對(duì)照組相比較,存在149個(gè)差異表達(dá)基因,其中95個(gè)上調(diào),54個(gè)下調(diào),通路分析(Pathway分析)顯示差異表達(dá)基因主要富集在15個(gè)PATHWAY中,其中細(xì)胞因子與細(xì)胞因子受體相結(jié)合通路最顯著,而中性粒細(xì)胞活化肽(ENA78)為表達(dá)差異最為顯著(下調(diào))的細(xì)胞因子;(2)通過RT-qPCR方法驗(yàn)證了以上樣本(樣本集1)ENA78下調(diào),同時(shí)芯

8、片與RT-qPCR方法相關(guān)性較好(R2=0.6,p＜0.001)。同時(shí)在獨(dú)立大樣本中(樣本集2)使用RT-qPCR方法也驗(yàn)證了抑郁癥患者外周血ENA78表達(dá)水平低于健康對(duì)照(0.35±0.15 vs.0.57±0.25,t=7.76,p＜0.001),且抑郁癥患者血漿ENA78濃度也顯著低于健康對(duì)照(2.33±0.34 vs.2.51±0.40,t=3.32,p=0.001);(3)在另一獨(dú)立樣本集中(樣本集3)再次驗(yàn)證了抑郁癥患者血漿

9、ENA78濃度低于健康對(duì)照組(2.44±0.41 vs.2.81±0.32,t=5.82,p＜0.001)。進(jìn)一步根據(jù)文拉法辛療效將患者分成有效組(N=49)與無(wú)效組(N=12)后發(fā)現(xiàn),治療前無(wú)效組患者血漿ENA78濃度低于有效組患者(2.21±0.42 vs.2.50±0.39,p＜0.05,ANOVA Turkey法)。經(jīng)過文拉法辛治療8周后,血漿ENA78濃度與基線相比較更為下降(2.28±0.37 vs.2.44±0.41,t=

10、3.68.P=0.001)。然而分成有效組和無(wú)效組后發(fā)現(xiàn),有效組患者血漿ENA78顯著下降(治療前2.50±0.39 vs.治療后2.30±0.39,t=3.72,p=O.001),而無(wú)效組患者血漿ENA78濃度無(wú)變化(治療前VS.治療后2.21±0.42 vs.2.19+0.25,t=0.68,p=0.51)。
　　結(jié)論:(1)細(xì)胞因子與細(xì)胞因子受體結(jié)合通路與抑郁癥的發(fā)生可能有關(guān);(2)抑郁癥患者外周血ENA78水平下降,與抑郁