不同抗原識別方式對同種異體抗原特異性Treg免疫特性的影響.pdf

1、目的：CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell,Treg)是CD4+T細(xì)胞的一個重要亞群,具有免疫抑制性和誘導(dǎo)免疫無能兩大功能特征。其作用機(jī)制可能是通過細(xì)胞間直接接觸和/或分泌抑制性細(xì)胞因子發(fā)揮作用。在維持機(jī)體免疫內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、防止自身免疫性疾病發(fā)生、誘導(dǎo)移植耐受等方面都起著重要作用。但目前研究多著重于不同細(xì)胞因子的組合對Treg的影響,而忽略了不同抗原識別方式在Teg誘導(dǎo)中的重要作用。因此,本實(shí)驗(yàn)擬探討不同抗原

2、識別方式對同種異型Treg免疫學(xué)特性的影響,求證間接識別方式在對同種異體抗原特異性Treg的生成中是否存在關(guān)鍵作用。
　　 方法取移植前受者外周血單個核細(xì)胞(periphery blood mononuclear cell,PBMC),通過磁珠分離獲得CD4+CD25-Fcell。同時取供者PBMC于含重組人粒系-巨噬細(xì)胞系集落刺激因子(rhgranulocyte-macrophage clone-stimulatin fact

3、or,rhGM-CSF)75ng/ml、重組人白介素4(rhinterleukin4,rhIL-4)25ng/ml和雷帕霉素(rapamycin,RAPA)20ng/ml的完全培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)5d。收集培養(yǎng)4d后的受者未成熟樹突狀細(xì)胞(immaturedendritic cell,imDC)并加入供者PBMC裂解液以使擴(kuò)增的DC負(fù)載供者抗原共培養(yǎng)3d,作為抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cell,APC)。再將分離純

4、化的CD4+CD25T細(xì)胞和負(fù)載供者抗原的受者樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)5d;同時加入IL-210ng/ml、RAPA20ng/ml促進(jìn)細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)特異性Treg生成,以Treg1表示。同時在Treg誘導(dǎo)生成時不加入負(fù)載供者抗原的受者樹突狀細(xì)胞,而直接采用供者PBMC作為APC,通過直接抗原識別方式生成特異性Treg,以Treg2表示。并比較2種方式生成的Treg的免疫特性及誘導(dǎo)過程中細(xì)胞因子IL-2的分泌。
　　 結(jié)果
　　

5、1.通過間接抗原識別方式生成的Tregl生成率為62.4％,其增殖抑制率為63.5％;直接抗原識別方式生成的Treg2生成率44.4％,其增殖抑制率為45.8％。
　　 2.間接抗原識別方式誘導(dǎo)過程中細(xì)胞因子IL-2的分泌也明顯優(yōu)于直接抗原識別方式。
　　 結(jié)論
　　 1.與直接抗原識別方式相比,間接抗原識別方式誘導(dǎo)生成的Treg的數(shù)量更多及免疫特性更強(qiáng)。
　　 2.間接抗原識別方式較直接抗原識別方式在誘