多發(fā)性骨髓瘤患者Toll樣受體表達及功能的研究.pdf

1、蘇州大學博士學位論文多發(fā)性骨髓瘤患者Toll樣受體表達及功能的研究姓名：徐楊申請學位級別：博士專業(yè)：內科學（血液病學）指導教師：吳德沛20100301中文摘要 多發(fā)性骨髓瘤患者T o l l 樣受體表達及功能的研究二、L P S 和C p G D N A 對M M 細胞增殖和凋亡影響和機制的研究目的初步探討L P S 和C p G D N A 對M M 細胞增殖和凋亡的影響及其機制。方法M ’丌方法檢測P a m 3 C s k 4 ，

2、L P S 和C p GD N A 刺激后原代M M 細胞，M M細胞系R P M I ．8 2 2 6 以及X G ．7 細胞增殖水平。A n n e x i n V 抗體檢測無血清培養(yǎng)狀態(tài)下予L P S 和C p G D N A 刺激后原代M M 細胞，R P M I ．8 2 2 6 細胞以及X G ．7 細胞的凋亡。E L I S A 檢測培養(yǎng)細胞上清中I L ．6 水平，I L ．6 中和性抗體封閉后，M T T 方法檢測原代

3、M M 細胞，R P M I ．8 2 2 6 細胞和X G ．7 細胞的生長。結果L P S 和C p GD N A 刺激后原代M M 細胞，R P M I ．8 2 2 6 細胞以及X G ．7 細胞增殖水平較對照組以及P a m 3 C s k 4 組高。P a m 3 C s k 4 ，L P S 和C p GD N A 并不能顯著促進正常的漿細胞的增殖。在血清饑餓的情況下，原代M M 細胞，R P M I ．8 2 2 6 細

4、胞以及X G ．7 細胞都表現(xiàn)出了一定比例的凋亡，P a m 3 C s k 4 刺激并不能顯著的減少凋亡細胞的比例，而L P S 和C p G D N A 則可以顯著地保護細胞凋亡。對于正常的漿細胞，則在P a m 3 C s k 4 ，L P S 和C p GD N A 三組中，凋亡細胞的比例變化則不明顯。E L I S A 檢測L P S 和C p G D N A 刺激后的原代M M 細胞，R P M I ．8 2 2 6 細胞以

5、及X G ．7 細胞上清中的I L ．6 ，可以觀察到L P S 和C p G D N A 可以顯著的增強培養(yǎng)細胞上清中的I L ．6 水平。預先使用I L ．6 中和性抗體封閉，M T T 法檢測M M 細胞的增殖，結果提示與正常I g G比較，I L ．6 中和性抗體可以降低T L R 介導的M M 細胞的增殖。結論L P S 和C p G D N A 可以顯著地促進M M 細胞的增殖，同時L P S 和C p G D N A可以顯

6、著地保護M M 細胞在血清饑餓誘導的凋亡。L P S 和C p GD N A 可以促進M M細胞上清中I L ．6 的分泌，并且預先加入中和性I L ．6 的抗體則可以阻斷L P S 和C p GD N A 促進M M 細胞增殖的作用。三、L P S 和C p G D N A 促進M M 細胞生長相關信號通路的研究目的初步探討L P S 和C p GD N A 對M M 促進M M 細胞生長可能依賴的信號通路。方法在相應的信號通路抑制劑

7、存在下，M 1 v r 方法檢測L P S 和C p G D N A 刺激后U 2 6 6 及R P M I 一8 2 2 6 細胞增殖。W e s t e r n 方法檢測相應的信號分子的激活。細胞核漿分離方法檢測N F ．K B P 6 5 亞基入核水平，M T T 方法檢測在N F ．K B 激活和抑制情況下U 2 6 6 及R P M I ．8 2 2 6 細胞增殖，定量P C R 檢測在N F ．K B 激活和抑制情況下U 2