黑胡椒酰胺成分分離鑒定及細(xì)胞抑制活性研究.pdf

1、近年來(lái)胡椒因其生物化學(xué)特性及藥用價(jià)值,引起了人們的廣泛關(guān)注。胡椒不僅可以作為香料和調(diào)味料,還有非常重要的藥用價(jià)值,如抗菌消炎、抗腫瘤、保肝護(hù)肝、祛風(fēng)退熱、健胃等,據(jù)大量文獻(xiàn)報(bào)道,胡椒中的活性成分主要是酰胺類(lèi)化合物,其中尤以胡椒堿活性最強(qiáng)含量也最多。目前胡椒中酰胺類(lèi)物質(zhì)的傳統(tǒng)提取分離方法繁雜,需要結(jié)合多重分離方法,操作繁瑣且很難獲得高純度的化合物,故建立一套快速高效的分離純化方法將具有重要意義。
　　 本研究采用高速逆流色譜技術(shù)結(jié)

2、合Sephadex LH-20和制備液相色譜,從海南黑胡椒中分離出多種單體。具體方法如下:
　　 6kg胡椒粉經(jīng)85％乙醇萃取后加乙酸酸化,氯仿萃取除去非生物堿類(lèi)雜質(zhì)后,用氨水處理成堿性,然后用氯仿提取總堿得氯仿相,減壓濃縮后得到105g氯仿相樣品用于后續(xù)化學(xué)成分的分離。
　　 氯仿相采用溶劑系統(tǒng)石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(1:3:1.5:1,v/v),通過(guò)柱容積為1200mL的高速逆流色譜進(jìn)行分離,得到FrA～FrG七

3、組組分,其中FrE為單一的純凈化合物E,純度達(dá)99.26％,FrD和FrF經(jīng)制備型高效液相色譜純化后分別得到單體化合物D和F,其余組分經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20結(jié)合制備液相色譜純化,最終又分別得到10個(gè)單體化合物A1、A2、B1、B2、B3、B4、C1、C2、C3和G1,對(duì)得到的這13個(gè)化合物采用質(zhì)譜和1H-NMR、13C-NMR等核磁共振技術(shù)進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。它們分別是:
　　 Retrofractamide-A(A1)、

4、N-isobutyl-(2E,4E)-decadienamide(A2)、Retrofractamide-C(B1)、piperoleine A(B2)、(2E,6E)-7-(1,3-benzodioxol-5-y1)-1-(piperidin-1-y1)hepta-2,6-dien-1-one(B3)、Retrofractamide-B(B4)、piperoleine B(C1)、pipernonaline(C2)、pipercycl

5、obutanamides A(C3)、Delaydropipernonaline(D)、Piperine(E)、(2E,4E,14Z)-N-Isobutyleicosa-2,4,14-trienamide(F)、N-isobutyl-(2E,4E,12Z)-octadecatrienamide(G)。
　　 選擇化合物A1、B1、B4、C2、D和E進(jìn)行細(xì)胞體外增殖抑制試驗(yàn),結(jié)果表明受試物對(duì)正常細(xì)胞J744.1小鼠腹腔巨噬細(xì)胞毒性