突變人CD59基因在真核細胞中的表達活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的 構建突變人CD59的真核表達系統(tǒng),獲得高效表達突變人CD59的CHO細胞株,并進行糖化和非糖化突變人CD59蛋白功能的檢測,探討CD59作為補體攻膜復合體抑制物在糖尿病血管并發(fā)癥病理機制中的重要作用,為人類糖尿病血管增殖癥的發(fā)病機理提供依據(jù).方法突變人CD59的真核細胞表達系統(tǒng)的建立:將含有突變人CD59的重組PALTER-MAX質粒與PcDNA運用陽離子脂質體介導法共轉染入CHO細胞;用新霉素類似物(G418)篩選出陽性克隆,并

2、用流式細胞術進一步篩選出高效表達克隆,建立穩(wěn)定高效表達CHO細胞株.應用免疫組化方法、免疫熒光技術進一步鑒定穩(wěn)定高效表達CHO細胞株;裂解細胞,應用SDS-PAGE凝膠電泳技術、免疫印跡技術、固相酶聯(lián)免疫吸附試驗驗證穩(wěn)定高效表達陽性細胞CD59的表達;高糖培養(yǎng)穩(wěn)定高效表達陽性細胞,并運用BCECF染料釋放試驗研究糖化和非糖化突變人CD59的抗補體活性.結論1.構建突變人CD59 HM1、HM2的真核細胞表達系統(tǒng),獲得穩(wěn)定高效表達突變人C

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