DFP對(duì)鋁染毒大鼠神經(jīng)系統(tǒng)及肝、腎組織保護(hù)作用的機(jī)理研究.pdf

1、【目的】 隨著科技的發(fā)展，鋁的生物毒性作用也逐漸被揭示。人體攝入過(guò)多的鋁，可在體內(nèi)產(chǎn)生蓄積作用，并擾亂中樞神經(jīng)的活動(dòng)，引起消化系統(tǒng)功能紊亂，妨礙正常的鈣、磷代謝，抑制機(jī)體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)，引起多種疾病。目前臨床上對(duì)于鋁負(fù)荷過(guò)多引起的疾病傾向于使用鋁螯合劑。本研究把DFP(1，2-二甲基-3-羥基-4-吡啶酮)作為一種新型鋁螯合劑進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，主要從其對(duì)鋁染毒大鼠神經(jīng)系統(tǒng)、肝、腎組織的保護(hù)作用進(jìn)行研究，探討DFP對(duì)染鋁大鼠保護(hù)作用的

2、機(jī)理，為尋求一種安全有效的排鋁藥物提供依據(jù)。 【方法】 1.DFP對(duì)鋁染毒大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用1.1 DFP對(duì)鋁染毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善健康雄性Wistar大鼠30只，160～220g，自由飲水和進(jìn)食。按體重隨機(jī)分為6組：陰性對(duì)照組、鋁染毒組、DFP低、中、高劑量組、預(yù)防組，以灌胃方式給藥，除陰性對(duì)照組外其余各組均給予AlCl3溶液進(jìn)行染毒，制備大鼠鋁中毒模型，其中預(yù)防組在染毒同時(shí)給予DFP；染毒4周后，陰性對(duì)照組、

3、鋁染毒組給予生理鹽水，DFP低、中、高劑量組給予DFP 2周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前兩天，進(jìn)行大鼠迷宮實(shí)驗(yàn)，研究DFP對(duì)鋁染毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善作用。 1.2 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中鋁的排出作用及對(duì)其他必需元素的影響給藥結(jié)束后處死大鼠，取各組大鼠腦組織，用微波消解儀消化后，石墨爐原子吸收分光光度法測(cè)腦組織中鋁含量，火焰原子吸收分光光度法測(cè)鋅、銅、鐵、鈣、鎂含量，觀察DFP的排鋁效果以及對(duì)腦組織必需元素的影響。 1.3 DFP

4、對(duì)鋁致大鼠海馬損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察取各組大鼠海馬蘇木素.伊紅染色(HE)染色，進(jìn)行病理學(xué)觀察，觀察鋁對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病理形態(tài)學(xué)改變及DFP對(duì)其恢復(fù)作用。 1.4 DFP對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)的恢復(fù)作用取各組大鼠測(cè)腦組織勻漿，測(cè)定乙酰膽堿酯酶(AchE)活力，探討DFP對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)的恢復(fù)作用。 1.5 DFP對(duì)中樞神經(jīng)抗氧化系統(tǒng)的恢復(fù)作用取各組大鼠腦組織勻漿，測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活

5、力和丙二醛(MDA)含量，研究DFP對(duì)中樞神經(jīng)抗氧化系統(tǒng)的恢復(fù)作用。 1.6 DFP對(duì)染鋁大鼠腦組織中ATP酶的影響取各組大鼠測(cè)腦組織勻漿，測(cè)定Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase的活力。 2.DFP對(duì)鋁染毒大鼠肝臟的保護(hù)作用2.1 DFP對(duì)鋁染毒大鼠肝臟中鋁的排出作用及對(duì)其他必需元素的影響取各組大鼠肝組織，用微波消解儀消化后，石墨爐原子吸收分光光度法測(cè)肝臟中鋁含量，火焰原子吸收分光光度法測(cè)鋅、銅、鐵

6、、鈣、鎂含量，觀察DFP的排鋁效果以及對(duì)肝臟必需元素的影響。 2.2 DFP對(duì)鋁染毒大鼠肝臟功能的保護(hù)作用取各組大鼠血清，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶的活力，總蛋白、白蛋白、總膽紅素、結(jié)合膽紅素含量。 2.3 DFP對(duì)鋁致大鼠肝臟損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察取各組大鼠肝組織蘇木素-伊紅(HE)染色，進(jìn)行病理學(xué)觀察。 2.4 DFP對(duì)肝臟抗氧化系統(tǒng)的恢復(fù)作用取各組大鼠肝組織勻漿，測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱

7、甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活力和丙二醛(MDA)含量。 2.5 DFP對(duì)染鋁大鼠肝臟中ATP酶的影響取各組大鼠肝組織勻漿，測(cè)定Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase的活力。 3.DFP對(duì)鋁染毒大鼠腎臟的保護(hù)作用3.1 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腎臟中鋁的排出作用及對(duì)其他必需元素的影響取各組大鼠腎組織，用微波消解儀消化后，石墨爐原子吸收分光光度法測(cè)腎臟中鋁含量，火焰原子吸收分光光度法測(cè)鋅、銅、鐵、鈣、鎂含量，

8、觀察DFP的排鋁效果以及對(duì)腎臟必需元素的影響。 3.2 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腎臟功能的保護(hù)作用取各組大鼠血清，測(cè)定肌酐、尿素氮、尿酸的含量，探討DFP對(duì)鋁染毒大鼠腎臟功能的保護(hù)作用。 3.3 DFP對(duì)鋁致大鼠腎臟損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察取各組大鼠腎組織蘇木素.伊紅(HE)染色，進(jìn)行病理學(xué)觀察。 3.4 DFP對(duì)腎臟抗氧化系統(tǒng)的恢復(fù)作用取各組大鼠腎組織勻漿，測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)

9、活力和丙二醛(MDA)含量。 3.5 DFP對(duì)染鋁大鼠腎臟中ATP酶的影響取各組大鼠腎組織勻漿，測(cè)定Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase的活力。 【結(jié)果】 1.DFP對(duì)鋁染毒大鼠神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用1.1 DFP對(duì)鋁染毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善在大鼠迷宮實(shí)驗(yàn)中，鋁染毒組全天總反應(yīng)時(shí)間(TRT)顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組顯著低于鋁染毒組(P<0.05)，且各給藥組與陰性對(duì)照組比較差

10、異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；鋁染毒組大鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著多于陰性對(duì)照組(P<0.01)，各給藥組均顯著少于鋁染毒組(P<0.01)，且與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1.2 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中鋁的排出作用及對(duì)其他必需元素的影響鋁染毒大鼠血清中鋁含量顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.01)，高劑量組顯著低于鋁染毒組(P<0.01)，但各給藥組尚高于陰性對(duì)照組(P<0.01)；鋁染毒組大鼠腦鋁含量顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.01)，低、中、

11、高劑量組顯著低于鋁染毒組(P<0.01)，而且高劑量組與陰性對(duì)照相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 鋁染毒組大鼠腦組織中鋅含量顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，其他各組與陰性對(duì)照及染毒組相比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；錨染毒組大鼠腦組織中銅含量顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.01)，中、高劑量組顯著低于鋁染毒組(P<0.01)，而且高劑量組與陰性對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組大鼠腦組織中鈣、鐵、鎂的含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1.3 DF

12、P對(duì)鋁致大鼠海馬損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察染毒組大鼠海馬組織有明顯的病理改變，用藥各組與鋁染毒組相比較神經(jīng)元細(xì)胞基本正常，給藥各組中，預(yù)防組與高劑量組恢復(fù)情況較好，基本恢復(fù)到正常。 1.4 DFP對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)的恢復(fù)作用鋁染毒組大鼠腦組織中乙酰膽堿酯酶活力顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.01)，中、高劑量組顯著低于染毒組(P<0.05，P<0.01)，且與陰性對(duì)照組相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1.5 DFP對(duì)中樞神經(jīng)抗氧化系統(tǒng)的恢復(fù)

13、作用鋁染毒組大鼠腦組織中GSH-PX、SOD活力顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.01)，各給藥組均顯著高于鋁染毒組(P<0.0l，P<0.05)，且中、高劑量組及預(yù)防組與陰性對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；鋁染毒組大鼠腦組織中MDA含量顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組顯著低于鋁染毒組(P<0.05)，低、中、高劑量組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1.6 DFP對(duì)染鋁大鼠腦組織中ATP酶的影響各組大鼠腦組織中Na+K+

14、-ATP酶活力比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；鋁染毒組大鼠腦組織中Ca2+Mg2+-ATP酶活力顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)，高劑量組顯著高于鋁染毒組(P<0.05)，低、中、高劑量組成上升趨勢(shì)，而且各給藥組Ca2+Mg2+-ATP酶活力與陰性對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.DFP對(duì)鋁染毒大鼠肝臟的保護(hù)作用. 3.DFP對(duì)鋁染毒大鼠腎臟的保護(hù)作用. 【結(jié)論】 1.DFP通過(guò)對(duì)腦組織中鋁的促排，減少脂質(zhì)過(guò)

15、氧化的發(fā)生，恢復(fù)海馬組織病理改變，維持必需元素的平衡，改善ATP酶的活力，維持中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的協(xié)調(diào)性和完整性，對(duì)鋁引起的學(xué)習(xí)記憶能力的損傷起到一定的保護(hù)作用。 2.DFP通過(guò)與鋁螯合，減少鋁對(duì)肝臟中必需元素產(chǎn)生的影響，保護(hù)損傷的肝功能，維持肝臟細(xì)胞生物膜結(jié)構(gòu)的完整性，并通過(guò)提高SOD活力，抑制氧化應(yīng)激的發(fā)生，進(jìn)而改善肝臟病理?yè)p害，從多方面對(duì)鋁染毒大鼠肝臟起到保護(hù)作用。 3.DFP通過(guò)促進(jìn)鋁的排出，恢復(fù)腎功能，對(duì)鋁中毒