谷氨酸發(fā)酵中生物素含量的測(cè)定及控制.pdf

1、本文分別采用微生物法、熒光法和高效液相色譜法對(duì)谷氨酸發(fā)酵原料中的生物素含量進(jìn)行測(cè)定，以尋求一種簡(jiǎn)捷、快速、準(zhǔn)確的生物素測(cè)定方法，為谷氨酸發(fā)酵生產(chǎn)中生物素的控制提供了可靠的理論依據(jù)，并深入探討了生物素對(duì)谷氨酸發(fā)酵的影響以及發(fā)酵過(guò)程中生物素濃度的控制。 首先，利用微生物法測(cè)定生物素含量，添加不同濃度的生物素標(biāo)準(zhǔn)溶液到培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)至菌體對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，立即測(cè)吸光率。培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基pH7.0;250mL三角瓶裝液量為30mL;32℃

2、、200r/min培養(yǎng)12h。以生物素濃度為橫坐標(biāo)，吸光率為縱坐標(biāo)，繪制生物素標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程：Y=0.1857X+0.0049，R2=0.9982。玉米漿、糖蜜和淀粉水解糖液樣品稀釋后添加到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12h，通過(guò)生物素標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出對(duì)應(yīng)的生物素含量。該法測(cè)得玉米漿、糖蜜和淀粉水解糖液中的生物素含量分別為927、2106和6041.μg/L。 其次，利用酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光法測(cè)定生物素含量時(shí)對(duì)樣品的處理和測(cè)定條件進(jìn)行了探討。

3、玉米漿樣品酸解：取一定量玉米漿樣品，加入1.5倍體積的6mol/L的鹽酸，121℃酸解100min;糖蜜樣品酸解：取一定量糖蜜樣品，加一倍體積的重蒸水和1.5倍體積的6mol/L的鹽酸，121℃酸解100min。酸解后的樣品及淀粉水解糖液樣品4000r/min離心15min，上清液用1mol/L氫氧化鈉調(diào)pH至7.5，再用pH7.5磷酸鹽緩沖液定容.熒光法測(cè)定工作條件：激發(fā)波長(zhǎng)為496nm，發(fā)射波長(zhǎng)為516nm；緩沖液選用pH7.5的磷

4、酸鹽緩沖液；反應(yīng)溫度20℃以下：10min內(nèi)完成測(cè)定。該法測(cè)得玉米漿、糖蜜和淀粉水解糖液中生物素的含量分別為940、2180和617μg/L。 再次，在高效液相色譜法測(cè)定生物素實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，對(duì)玉米漿、糖蜜樣品的脫色條件和測(cè)定的色譜條件進(jìn)行了探討。玉米漿、糖蜜樣品處理：玉米漿120mL、糖蜜120mL(加120mL蒸餾水)，分別加入180mL6mol/L鹽酸，121℃下酸解100min，酸解后的樣品4000r/min離心15min，

5、上清液調(diào)pH3.0，用活性炭脫色。活性碳脫色條件：pH3.0、80℃、30min。濃縮過(guò)濾：脫色后的樣品及120mL淀粉水解糖液樣品用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器分別濃縮至2-3mL，用0.45μm濾膜過(guò)濾后即可進(jìn)行HPLC分析。色譜條件：HypersilODS(25μm，5.0mm×250mm)色譜柱；流動(dòng)相為甲醇-0.1％三氟乙酸水溶液；pn值為3.0；流速為1mL/min;紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；進(jìn)樣量為30μL。該法測(cè)得玉米漿、糖蜜和淀粉水解糖