奶牛囊腫黃體及不同時期妊娠黃體差異蛋白組學研究.pdf

1、黃體作為一個暫時的分泌器官組織對于奶牛繁殖至關重要，對于發(fā)情周期的形成、早期妊娠、早期胚胎的入植、胚胎的維持、妊娠狀態(tài)的調節(jié)都有重要的意義。通過對黃體蛋白質表達及潛在功能分析，可為揭示黃體在奶牛生殖生理過程中的作用機理提供了一種新的研究角度。本實驗通過雙向電泳技術建立黃體蛋白表達圖譜，通過PDQuest8.0軟件對圖譜進行分析，分別比較不同黃體間的差異蛋白，并對差異蛋白斑點進行質譜鑒定。
　　通過比較不同制備方法、不同規(guī)格IPG膠

2、條、不同濃度SDS-PAGE膠濃度，優(yōu)化試驗條件和相關的參數，建立奶牛黃體雙向電泳蛋白圖譜。最終選定TCA-丙酮沉淀法制各樣品，18 cmpH4～7的IPG膠條及12％的SDS-PAGE凝膠濃度，得到了高質量的蛋白點，分離得到1071個左右的蛋白點的奶牛黃體蛋白2-DE圖譜。
　　通過雙向電泳技術，對正常黃體和發(fā)生囊腫黃體組織進行分析，分析獲取8個差異蛋白點，質譜成功鑒定出6個:α-1-酸性蛋白，膠質酸性蛋白，核磷蛋白，牛血清白蛋

3、白晶體結構A鏈，絲氨酸蛋白酶抑制蛋白，泛素羧基末端水解酶，其中α-1-酸性蛋白可能與黃體囊腫發(fā)生或相關組織造成的炎癥反應有關，膠質纖維酸性蛋白可能與黃體囊腫造成的激素分泌的異常有關，核磷蛋白本身不僅參與卵巢正常的生理生化過程還可能參與了黃體囊腫的發(fā)生，泛素羧基末端水解酶可能與卵巢的發(fā)育和卵黃的發(fā)育有關。
　　通過雙向電泳技術對不同時期黃體進行研究，將黃體分為未妊娠黃體組、妊娠三個月黃體組和妊娠六個月黃體組，成功鑒定出了6種蛋白質:

4、26s蛋白酶體非酶調節(jié)亞基蛋白，纖維蛋白原γ多肽，DNA拓撲異構酶蛋白，核纖層蛋白β，硫氧還原蛋白，微管蛋白β-5鏈，26s蛋白酶體調節(jié)亞基蛋白可能與妊娠胚胎的早期活動有關，纖維蛋白原γ可能與妊娠的維持作用有關，DNA拓撲異構酶可能與黃體的形成有關，核纖層蛋白隨著妊娠期的增長表達量在減少可能與黃體細胞的活性有關，硫氧還原蛋可能與黃體的維持調控有關。
　　本研究建立并優(yōu)化了奶牛黃體蛋白雙向電泳技術體系，為黃體蛋白差異蛋白組學研究奠定