改良細(xì)胞因子雞尾酒法對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)的研究.pdf

1、目的:探討優(yōu)化人γhG-CSF動(dòng)員的外周血采集物來(lái)源的樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)成熟誘導(dǎo)條件,以便制備更有效的DC疫苗應(yīng)用于臨床,觀察并比較不同誘導(dǎo)條件下制備的DC疫苗在體外特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)的能力。
　　方法:利用密度梯度離心法從重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(γhG-CSF)動(dòng)員的外周血采集物分離出單個(gè)核細(xì)胞,以重組人粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(γhGM-CSF)和重組人白細(xì)胞介素-4(γhIL-4)體外誘導(dǎo)

2、成不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(imDC),分別采用傳統(tǒng)細(xì)胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良細(xì)胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI:C、CpGODN)刺激成熟,并設(shè)有對(duì)照組(只加IL-4、GM-CSF)。3d后收獲成熟DC,觀察細(xì)胞形態(tài)、流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC的內(nèi)吞能力通過(guò)異硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖(FITC-Dextran)、檢測(cè)DC表面CD83、CD1a、CD80、HLA-DR、CD86和CCR-

3、7,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)其IL-12、IL-10的分泌,MTT法檢測(cè)其刺激淋巴細(xì)胞增殖能力。實(shí)驗(yàn)中三組DC分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞的總RNA,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)IFN-γ的分泌,乳酸脫氫酶(LDH)釋放法測(cè)定殺傷腫瘤活性。
　　結(jié)果:傳統(tǒng)細(xì)胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良細(xì)胞因子雞尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、polyI:C、CpGODN)兩種方法均能誘導(dǎo)DC成熟,以

4、改良細(xì)胞因子雞尾酒效果更佳,對(duì)照組幾乎不誘導(dǎo)DC成熟。改良雞尾酒方法誘導(dǎo)的成熟DC的FITC-Dextran內(nèi)吞能力明顯下降;DC成熟的表面標(biāo)志物CD83、CD1a的表達(dá)率分別是84.44％、87.94%(P<0.05);IL-12分泌量明顯增高(P<0.05);IL-10分泌量明顯增高(P<0.05);成熟DC能有效的刺激T淋巴細(xì)胞增殖;轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞的總RNA后的改良組DC的IFN-γ分泌水平明顯高于前兩組(P<0.05),并能誘