人胎兒卵巢裸鼠體內(nèi)埋植的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：將冷凍前后及培養(yǎng)前后人胎兒卵巢組織埋植入去勢(shì)BALB/c-nu/nu裸鼠體內(nèi)，通過(guò)觀察受體陰道脫落細(xì)胞的變化、埋植卵巢及受體子宮內(nèi)膜的組織學(xué)改變、受體血清雌二醇水平，判斷胎兒卵巢組織埋植后的存活、生長(zhǎng)及功能狀況。探討人胎兒卵巢移植的效果及可行性，為臨床胎兒卵巢移植治療卵巢早衰等內(nèi)源性雌激素缺乏性疾病提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依掘。 方法：選取4～6周齡健康雌性BALB/c裸鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。隨機(jī)分為以下6組：O組為正常對(duì)照組(僅行背部皮膚

2、、筋膜、肌層切開縫合)；A組為去勢(shì)對(duì)照組(行雙側(cè)卵巢切除)；B組為新鮮胎兒卵巢埋植組(去勢(shì)后皮下埋植新鮮人胎兒卵巢)；C組為凍融胎兒卵巢埋植組(去勢(shì)后皮下埋植凍存復(fù)蘇后的人胎兒卵巢)；D組為新鮮胎兒卵巢培養(yǎng)后埋植組(去勢(shì)后皮下埋植體外培養(yǎng)后的新鮮胎兒卵巢)；E組為凍融胎兒卵巢培養(yǎng)后埋植組(去勢(shì)后皮下埋植體外培養(yǎng)后的凍融胎兒卵巢)。供體選取胎齡為20～28周韻人胎兒卵巢20例。觀察胎兒卵巢卵泡發(fā)育情況、裸鼠陰道脫落細(xì)胞變化、裸鼠子宮內(nèi)膜的

3、組織學(xué)形態(tài)及血清雌二醇(E<,2>)水平，判斷胎兒卵巢在裸鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)發(fā)育及功能狀況。 結(jié)果：1.陰道脫落細(xì)胞變化 O組呈正常動(dòng)情周期變化；A組1周內(nèi)角化上皮逐漸減少，出現(xiàn)大量未成熟有核上皮細(xì)胞，呈現(xiàn)雌激素缺乏狀態(tài)。在埋植3周后B組、C組、D組及E組裸鼠陰道脫落細(xì)胞涂片顯示逐漸增多的鱗片狀無(wú)核角化上皮細(xì)胞，角化上皮超過(guò)總數(shù)的50％，提示有雌激素的作用；在埋植6周內(nèi)共有5只裸鼠恢復(fù)了動(dòng)情周期。2.裸鼠血清雌二醇(E<,2>)的水

4、平A組血清E<,2>水平明顯低于O組，兩者差異顯著(P<0.001)；B組、C組、D組、E組血清E<,2>水平均明顯高于A組，差異有顯著性(P<0.001)；B組、C組、D組、E組血清E2水平與o組比較，均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；相同埋植時(shí)間內(nèi)B組與C組血清E2水平無(wú)顯著性差異(P>0.05)；D組血清E2水平與B組無(wú)顯著性差異(P>0.05)，E組血清E<,2>水平高于C組，差異有顯著性(P<0.001)。3．埋植卵巢的組織學(xué)

5、觀察 與未埋植的胎兒卵巢組織相比，埋植后胎兒卵巢內(nèi)原始卵泡的比例顯著下降(P<0.05)，初級(jí)卵泡與次級(jí)卵泡的比例顯著上升(P<0.001)；原始卵泡進(jìn)一步發(fā)育，表現(xiàn)為卵母細(xì)胞體積增大，扁平的顆粒細(xì)胞體積增大變高，向立方形細(xì)胞過(guò)渡，顆粒細(xì)胞數(shù)量增多，組織內(nèi)可見豐富的血管網(wǎng)，埋植組織未見明顯的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象。 4．子宮內(nèi)膜腺體的組織學(xué)觀察與O組比較A組子宮內(nèi)膜明顯變薄，腺體萎縮，少而短，B組、C組、D組、E組子宮內(nèi)膜呈不同程度

6、的增生，腺體明顯增多增長(zhǎng)，腺腔增大。 結(jié)論：1．人胎兒卵巢組織埋植入去勢(shì)裸鼠體內(nèi)后，能夠重新建立血液供應(yīng)在異體內(nèi)存活，并且具有分泌雌激素的能力，可以作為移植的供體。2．人胎兒卵巢組織埋植入去勢(shì)裸鼠體內(nèi)后，原始卵泡進(jìn)一步發(fā)育，初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡的比例上升，去勢(shì)鼠體內(nèi)雌激素水平升高，說(shuō)明生長(zhǎng)期卵泡是去勢(shì)鼠體內(nèi)E<,2>的主要來(lái)源。3．冷凍不影響人胎兒卵巢的移植效果，說(shuō)明胎兒卵巢能耐受凍融過(guò)程，為人胎兒卵巢庫(kù)的建立提供了依據(jù)。4．部分