bFGF單抗聯(lián)合Lobaplatin抑制肺腺癌細胞增殖、轉移和誘導凋亡的機制研究.pdf

1、目的：(1)探討堿性成纖維細胞生長因子單克隆抗體（bFGF單抗）聯(lián)合Lobaplatin(LBP)對肺癌細胞系A549細胞增殖、凋亡和轉移的影響及其可能的作用機制。
　　(2)系統(tǒng)評價Lobaplatin聯(lián)合化療治療晚期非小細胞肺癌（NSCLC）的療效和安全性。
　　方法：制備腹水型bFGF單抗,體外培養(yǎng)肺腺癌A549細胞，將細胞分為四組（control組、bFGF單抗組、LBP組及bFGF單抗+LBP組）處理48h。

2、>　?。?）CCK-8法測定其對A549細胞增殖的影響；流式細胞儀檢測藥物作用后細胞周期分布的變化，Western blot法檢測細胞周期相關蛋白CDK4和cyclin D的表達水平。
　　（2）流式細胞儀檢測藥物作用A549細胞凋亡，DAPI染色激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞凋亡過程中細胞核的變化，western blot法檢測細胞凋亡PI3K/Akt信號通路有關蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BA

3、X、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表達變化。
　　（3）劃痕實驗及Transwell小室檢測不同藥物分組對A549細胞侵襲及遷移能力的影響，Western blot法檢測細胞侵襲遷移相關蛋白MMP-2和MMP-9的表達。（4）計算機檢索Cochrane Library、PubMed、EMBase、中國期刊全文數(shù)據庫(CNKI)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據庫（CBM）、維普中文

4、期刊數(shù)據庫、萬方數(shù)據庫，納入LBP聯(lián)合化療對比順鉑聯(lián)合化療治療晚期NSCLC的隨機對照試驗（PCT），根據納入與排除標準篩選后，運用改良后的Jadad量表評價納入文獻的方法學質量，并采用Cochrane協(xié)作網提供的Rev Man5.2統(tǒng)計學軟件進行Meta分析。
　　結果：
　　（1）CCK-8結果顯示不同的藥物分組可抑制A549細胞的增殖，并以bFGF單抗+LBP對肺癌A549細胞增殖作用最為明顯，流式細胞儀檢測結果發(fā)現(xiàn)b

5、FGF單抗聯(lián)合LBP可抑制A549細胞周期的進行，阻止細胞周期在G0/GI期。Western blot檢測結果表明bFGF單抗和LBP可下調細胞內CDK4和cyclin D的表達。（2）流式細胞儀檢測結果顯示bFGF單抗，LBP單獨及聯(lián)合可誘導A549細胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)可引起細胞核固縮、核裂解。Western blot結果表明bFGF單抗聯(lián)合LBP通過下調bcl-2、casepase-3、casepase-9、

6、PARP的表達，上調BAX、cleave-casepase-3、 cleave-casepase-9、 cleave-PARP的表達來誘導A549細胞的凋亡。
　　（3）劃痕實驗和Transwell小室基質膠實驗顯示bFGF單抗，LBP單獨及聯(lián)合可抑制A549細胞侵襲遷移能力。Western blot檢測結果發(fā)現(xiàn)藥物作用后可下調MMP-2和MMP-9蛋白表達來阻斷細胞的侵襲遷移。
　?。?）共納入11項RCT，合計724例患

7、者。Meta分析結果顯示，試驗組患者的客觀緩解率[ RR=0.96，95％CI(0.79，1.16)，P=0.65]、白細胞減少發(fā)生率[ RR=0.95.，95%CI(0.83，1.08)，P=0.42]和血小板減少發(fā)生率[ RR=0.96，95%CI(0.80，1.15)，P=0.68]與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義；但試驗組患者惡心嘔吐發(fā)生率[RR=0.55，95%CI(0.46，0.64)，P＜0.05]、腹瀉發(fā)生率[ RR=0.4

8、3，95%CI(0.31，0.61)，P＜0.05]顯著低于對照組，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　（1）bFGF單抗聯(lián)合LBP作用于細胞48h后可抑制肺腺癌A549細胞的增殖，阻止細胞由G1期進入S期、G2期進入M期，其作用機制可能是下調細胞內CDK4和cyclin D的表達發(fā)揮生物學作用。
　?。?）bFGF單抗聯(lián)合LBP作用于細胞48h后可促進肺腺癌A549細胞的凋亡，形態(tài)學觀察可以看到引起細胞核固縮

9、、核裂解，其機制可能與改變細胞內PI3K/Akt信號通路，下調bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表達，上調BAX、cleave-casepase-3、 cleave-casepase-9、 cleave-PARP的表達有關。
　　（3）bFGF單抗和LBP單藥和聯(lián)合作用均可阻止肺腺癌A549細胞的轉移，兩藥聯(lián)合應用對A549細胞具有協(xié)同作用。這一效應可能與特異性的引起基質金屬蛋白酶MMP-2和MMP