肢體缺血后適應對缺血再灌注損傷小鼠腦保護作用及機制研究.pdf

1、目的：腦缺血再灌注損傷是缺血性腦血管病的治療瓶頸。諸多動物實驗研究發(fā)現(xiàn)給予肢體缺血后適應（Limb ischemic postconditioning，LIPostC）對心臟、腎、腦等臟器的缺血再灌注損傷有明顯的保護作用，但其腦保護作用的機制尚不明確。本課題通過觀察LIPostC對局灶性腦缺血再灌注（ischemia reperfusion，I/R）損傷小鼠的腦保護作用，探討其保護機制是否與激活nuclear factor erythr

2、oid2-related factor2（Nrf2）/antioxidant response element（ARE）信號通路抗氧化應激作用相關，并研究其對血腦屏障（blood brain barrier，BBB）的保護作用是否與激活Kruppel樣轉錄因子2（Kruppel-like factor2，KLF2）上調occludin的表達相關。
　　方法：采用健康成年雄性CD1小鼠90只，應用改良Longa線栓法建立小鼠短暫性右

3、側大腦中動脈閉塞( transient middle cerebral artery occlusion，tMCAO)模型。實驗隨機分成：假手術組（Sham）、腦缺血-再灌注組（I/R）、肢體缺血后適應組（LIPostC）。Sham組只分離頸部血管，不插線栓。I/R組：為小鼠右側tMCAO模型組。LIPostC組：在I/R組缺血60 min，再灌注即刻給予同時夾閉雙側股動脈5 min，再灌注5 min，反復三次。在各組小鼠腦缺血60 m

4、in，術后24 h后，分別采用行為學評分、2％的2，3，5-三苯基四唑氮紅(triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色、干濕重法觀察LIPostC的腦保護作用，采用免疫組化、Western blot和實時熒光定量PCR（qRT-PCR）方法測定Nrf2、NQO-1、HO-1的表達，采用試劑盒檢測超氧化物歧化酶（SOD）的活性及丙二醛（MDA）含量的變化情況，通過伊文思藍（Evans blue，EB）滲出情況

5、評估血腦屏障的完整性，Western blot方法測定KLF2、occludin的表達。
　　結果： Sham組中小鼠行為學功能正常，而I/R組、LIPostC組小鼠均出現(xiàn)不同程度的神經功能缺損，LIPostC組與I/R組相比可明顯降低神經功能障礙，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；三組小鼠未梗死側腦組織含水量無明顯差異，I/R組與LIPostC組小鼠梗死側腦組織含水量明顯高于Sham組，LIPostC組梗死側腦組織含水量低于I

6、/R組，差異具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；Sham組為正常腦組織形態(tài)無梗死灶，I/R組、LIPostC組可見蒼白色梗死灶，LIPostC組與I/R組比較腦梗死體積明顯減小，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　免疫組化結果顯示，Nrf2、NQO-1、HO-1陽性細胞數(shù)在I/R組表達較Sham組增加，LIPostC組中Nrf2、NQO-1、HO-1陽性細胞數(shù)增加更為顯著，與I/R組相比，結果具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；We

7、stern blot結果及qRT-PCR結果顯示，LIPostC組可上調Nrf2、NQO-1、HO-1蛋白水平表達，與I/R組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與I/R組相比，LIPostC組可明顯增加 SOD活性，減低 MDA的含量，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Evans Blue染色結果顯示，LIPostC能夠明顯減輕血腦屏障的損壞，減少EB滲出，與I/R組相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Western bl