強(qiáng)力霉素抑制結(jié)腸癌增殖、轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分強(qiáng)力霉素抑制體外培養(yǎng)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、明膠酶表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討強(qiáng)力霉素(Doxycycline，DC)抑制結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞增殖的作用機(jī)制和對(duì)明膠酶(MMP-2、MMP-9)表達(dá)的影響。 方法：采用四氮唑藍(lán)比色還原法檢測(cè)DC對(duì)LoVo細(xì)胞增殖的影響，應(yīng)用流式細(xì)胞儀AnnexinV-PI雙染法檢測(cè)LoVo細(xì)胞凋亡，同時(shí)利用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞線(xiàn)粒體跨膜電位，采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞表達(dá)MMP-2，9。

2、 結(jié)果：(1)DC抑制LoVo細(xì)胞的增殖：5~Wml、10~Wml、20~g／mlDC作用24h后，生長(zhǎng)抑制率分別為16．4％、37．0％、44．6％(P<0．01；P<0．01；P<0．01)，作用48h后，生長(zhǎng)抑制率分別18．6％、39．7％、49．2％(P<0．01：P<0．01；P<0．01)，呈劑量、時(shí)間依賴(lài)性；(2)DC誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞凋亡：在作用24h后，5gg／ml、10~g／ml、20~g／mlDC誘導(dǎo)LoVo細(xì)胞凋亡

3、比率分別為7．79±0．07％、16．05±0．25％、17．42±0．08％，與對(duì)照組1．04±0．05％相比差異有顯著意義(P<0．01；P<0．01；P<0．01)；(3)LoVo細(xì)胞線(xiàn)粒體跨膜電位：DC作用24h后，5pffml、10~g／ml、20gffml組細(xì)胞線(xiàn)粒體跨膜電位下降比率分別為6．53±0．06％、23．28±0．47％、26．08±0．39％，與對(duì)照組1．51±0．03％相比差異有顯著意義(P<0．01；P<0

4、．01；P<0．01)；(4)LoVo細(xì)胞表達(dá)MMP-2，9：DC作用24h后，LoVo細(xì)胞表達(dá)MMP-2、9量下降，并呈劑量依賴(lài)性。 結(jié)論：(1)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)強(qiáng)力霉素通過(guò)線(xiàn)粒體通路誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，從而抑制結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞增殖；(2)體外實(shí)驗(yàn)還證實(shí)強(qiáng)力霉素抑制結(jié)腸癌LoVo細(xì)胞MMP-2和MMP-9的表達(dá)。 第二部分強(qiáng)力霉素抑制裸鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究 目的：探討強(qiáng)力霉素抑制裸鼠人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移療效與機(jī)制。

5、 方法：脾切除法建立裸鼠人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型，應(yīng)用DC灌胃(30mg／kg．day)建立實(shí)驗(yàn)組，一月后處死裸鼠，通過(guò)大體和常規(guī)病理檢測(cè)觀(guān)察各組裸鼠肝轉(zhuǎn)移情況，應(yīng)用組織免疫化學(xué)法檢測(cè)肝轉(zhuǎn)移癌MMP-2、9的表達(dá)，明膠酶譜電泳法檢測(cè)肝組織MMP-2、9含量及活性。 結(jié)果：(1)大體和常規(guī)病理：本試驗(yàn)已成功建立裸鼠人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移動(dòng)物模型；(2)大體和常規(guī)病理：對(duì)照組裸鼠肝轉(zhuǎn)移癌數(shù)目較多或呈團(tuán)塊狀，實(shí)驗(yàn)組肝轉(zhuǎn)移癌散在，兩組差異有顯著

6、意義(P<0．05)；(3)組織免疫化學(xué)法：對(duì)照組肝轉(zhuǎn)移癌MMP-2、9染色呈深棕色，實(shí)驗(yàn)組染色強(qiáng)度明顯下降，對(duì)比兩組多功能真彩病理圖像分析系統(tǒng)讀取的灰度值，差異有顯著意義(P<0．01；P<0．01)；(4)明膠酶譜法檢測(cè)兩組肝組織MMP-2、9含量：實(shí)驗(yàn)組酶原型MMP-2、MMP-2、酶原型MMP-9、MMP-9含量均較對(duì)照組低，差異有顯著意義(P<0．01；P<0．01；P<0．01；P<0．01)。 結(jié)論：(1)本實(shí)驗(yàn)成