牙周組織工程用玉米醇溶蛋白多乳支架的制備及性能研究.pdf

1、目的：牙周病是一種慢性進(jìn)行性破壞性疾病，可造成牙周支持組織的破壞，最終導(dǎo)致牙齒松動(dòng)、脫落。長(zhǎng)期以來(lái)，人們努力在尋找能夠有效增加牙齒新附著，重建牙周支持組織的方法，但尚未達(dá)到理想效果。近年來(lái)，牙周組織工程技術(shù)的出現(xiàn)為臨床治療牙周病開(kāi)辟了新途徑。牙周組織工程利用生物材料學(xué)和生命科學(xué)的原理和方法重建新的具備原來(lái)形態(tài)和功能的牙周組織，達(dá)到修復(fù)和再生的目的，其涉及多孔支架、生長(zhǎng)因子、種子細(xì)胞三方面的內(nèi)容。
　　 支架材料不僅影響細(xì)胞的生物

2、學(xué)行為和培養(yǎng)效率，而且決定著移植入機(jī)體后能否與組織或器官良好的適應(yīng)、修復(fù)，是限制牙周組織工程應(yīng)用于臨床的一個(gè)關(guān)鍵因素。因此如何制備孔隙率高、孔隙貫通性好、生物學(xué)性能滿(mǎn)足生物功能需求的支架具有重要意義。基于玉米醇溶蛋白具有獨(dú)特的溶解特性、耐熱性、成膜性和天然可降解性等優(yōu)良性能，符合一般生物醫(yī)學(xué)材料的要求，本研究試圖將其作為支架材料制備多孔支架，對(duì)該支架的孔隙結(jié)構(gòu)、降解性能、生物相容性等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，進(jìn)而探討其應(yīng)用于牙周組織工程的可行性，旨

3、在尋找一種適合于牙周組織再生的支架材料。
　　 方法：
　　 1.支架的制備：將玉米醇溶蛋白溶于65％酒精中，以氯化鈉為致孔劑加入此溶液中，加熱攪拌成均勻分散的凝膠體系，澆鑄至器皿中，水浴加熱至酒精完全揮發(fā)，取出，置入37℃去離子水中瀝濾出氯化鈉顆粒，干燥，得多孔支架。
　　 2.孔隙率測(cè)定：選用相同粒徑的氯化鈉，按照氯化鈉的質(zhì)量百分含量分別為70％，75％，80％稱(chēng)取氯化鈉與玉米醇溶蛋白制備支架，比重瓶法測(cè)得支

4、架的孔隙率。
　　 3.孔徑大小趨勢(shì)觀察：選用粒徑尺寸分別為180～250pm，250～300μm，300～425μm;質(zhì)量百分含量均為80％的氯化鈉作為致孔劑制備支架，掃描電子顯微鏡觀察氯化鈉顆粒大小與支架孔徑大小的關(guān)系。
　　 4.降解實(shí)驗(yàn)：將重約W0的支架樣品放入37℃的膠原蛋白酶中降解，分別在第1，2，3，4，5，6，7d時(shí)取出樣品，用去離子水清洗樣品3次，干燥至恒重Wd。降解率(η)=(W0-Wd)W0×100

5、％。
　　 5.支架毒性評(píng)級(jí)
　　 5.1 浸提液的制備：將支架材料以一定比例加入DMEM中，得100％支架浸提液，并用DMEM稀釋?zhuān)媒K濃度分別為10％,50％，100％浸提液。
　　 5.2 浸提液實(shí)驗(yàn)：組織塊法原代培養(yǎng)人牙周膜細(xì)胞，取第3代細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板，孵育24h。棄液，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組(10％，50％，100％浸提液)、陽(yáng)性對(duì)照組(含0.64％苯酚的DMEM)和陰性對(duì)照組(DMEM)，加入相應(yīng)

6、培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24，48，72h后，MTT法測(cè)定細(xì)胞活力。計(jì)算相對(duì)增殖率，評(píng)價(jià)材料的毒性程度。
　　 6.直接接觸實(shí)驗(yàn)：支架紫外線消毒后于DMEM中浸提過(guò)夜，取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的人牙周膜細(xì)胞接種到支架上，觀察細(xì)胞在支架上的生長(zhǎng)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.支架外觀呈高孔隙率海綿體結(jié)構(gòu)，孔隙分布均勻，孔徑大小接近。
　　 2.氯化鈉粒徑相同，百分含量為70％，75％，80％時(shí)，支架的孔隙率分別為64.1％，7

7、0.5％，78.0％。
　　 3.氯化鈉百分含量相同，粒徑不同時(shí)，制備的支架均為互相連通的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，孔的貫通性良好，且孔徑尺寸隨著氯化鈉粒徑的增大而增大。
　　 4.隨著時(shí)間推移，支架的降解程度增加，第7d時(shí)降解率達(dá)8.19％。
　　 5.支架的細(xì)胞毒性評(píng)級(jí)為0～1級(jí)。
　　 6.成纖維細(xì)胞在支架上貼附緊密，伸展充分，沿孔隙邊緣生長(zhǎng)。
　　 結(jié)論：
　　 1.采用溶劑澆鑄/粒子瀝濾法能