基于濁毒學說對慢性萎縮性胃炎的臨床研究及對胃癌BGC-823細胞株體外實驗研究.pdf

1、慢性萎縮性胃炎（CAG）是消化系統(tǒng)的一種常見病，是指炎癥導致的胃腺體破壞、減少、萎縮、甚至消失，表面上皮細胞喪失分泌能力，黏膜肌層增厚的病理、臨床病癥。上世紀40年代Schindle首次提出CAG的概念，1978年WHO將其列為胃癌的癌前疾病或癌前狀態(tài)，而在CAG基礎上伴發(fā)的腸上皮化生（IM）和異型增生（Dys），則是胃癌的癌前病變（PLGC），癌變的發(fā)生率較高。CAG及其癌前病變已成為目前研究的重點，及早識別、防治癌前疾病和癌前病變，

2、成為降低胃癌發(fā)生率和死亡率行之有效的方法。目前，西醫(yī)學治療本病尚缺乏有效的治療手段。中醫(yī)藥在治療CAG方面有著明顯的優(yōu)勢，其改善患者癥狀及預防疾病向癌轉化等方面的療效肯定且顯著。
　　 中醫(yī)學將CAG病變歸屬于“胃脘痛”、“胃痞”、“痞滿”、“嘈雜”等病證范疇。導師李佃貴教授認為，隨著社會的發(fā)展，生活方式、飲食結構的改變，環(huán)境因素變化，包括大氣污染等，現(xiàn)代人的精神社會壓力加大，疾病模式會發(fā)生變化。在臨床診療中觀察到許多慢性疾病患

3、者病情反復，纏綿難愈，常有顏面晦濁、暗滯，少澤，大便粘膩不爽，小便黃，舌質暗紅，苔黃或黃膩，脈弦滑等脈證表現(xiàn)，李師在總結前人理論的基礎上，結合多年的臨證經驗，提出“濁毒學說”，認為濁毒既是一種對人體臟腑經絡及氣血陰陽均能造成嚴重損害的致病因素，同時也是多種病因導致臟腑功能紊亂、氣血運行失常，機體內產生的代謝產物不能及時正常排出，蘊積體內而化生的病理產物。其致病特點，（1）粘滯難解易阻遏氣機；（2）入血入絡易傷氣陰；（3）氣血失調易瘀易積

4、。濁毒為患所造成的病證，屬于濁毒證，是指以濁毒為病因使機體處于濁毒狀態(tài)從而產生特有臨床表現(xiàn)的一組或幾組證候群。運用濁毒學說指導CAG治療，初步取得了較為滿意的臨床療效。本研究旨在進一步完善該學說在CAG的證候規(guī)律，探討化濁解毒方藥的作用機制。
　　 目前，中醫(yī)關于CAG的證候分型，行業(yè)學會及各家經驗存在多種不同的觀點，如有肝胃不和、脾胃濕熱、濕濁中阻、胃絡瘀阻、脾胃虛弱、胃陰不足6個證型分類；有肝胃不和、脾胃虛弱（含虛寒）、脾胃

5、濕熱、胃陰不足、胃絡瘀阻、脾虛氣滯等證型分類；還有的分為氣陰兩虛，虛火灼胃和脾胃氣虛證型等等，繁雜不一，為臨床和科研工作帶來極大不便。
　　 中醫(yī)證候學研究是目前中醫(yī)藥研究工作的前沿領域，20年來，隨著統(tǒng)計學、流行病學、計量學、模糊數(shù)學等諸多學科知識的不斷滲透，被用于中醫(yī)證候診斷標準量化研究的方法也日益增多。聚類分析是將樣品個體或變量指標按其具有的特性進行分類的一種多元統(tǒng)計方法，分為樣品聚類分析和變量聚類分析，其目的是根據樣品或

6、指標間相似程度的大小，將性質相近的歸在同一類，而將性質相差比較大的歸在不同的類，在中醫(yī)證候研究中的合理應用能夠極大地提高中醫(yī)辨證的規(guī)范性和準確性。
　　 本研究采用聚類分析的方法，分析CAG較大樣本病例的臨床表現(xiàn)，以期為臨床提供較為合理、科學、規(guī)范的辨證分型，同時，通過應用本方法來探討濁毒證的證候規(guī)律。
　　 觀察CAG濁毒證患者的胃泌素（Gas）、胃動素（MTL）、生長抑素（SS）水平變化，探討CAG濁毒證證型與胃腸激

7、素之間的相關關系，進一步明確胃腸激素的變化在CAG中醫(yī)證型中是否有特異性，胃腸激素變化異常是否能導致不同證型臨床征象，提高對本證型的認識。
　　 CAG屬癌前疾病，CAG伴IM，被認為是萎縮的典型標志以及胃癌的前兆，通過上述分析，發(fā)現(xiàn)濁毒內蘊是本病的主要證候特點，為此，創(chuàng)立了化濁解毒方，并觀察本方治療CAG的臨床療效。
　　 通過觀察化濁解毒方藥及其拆方含藥血清對體外培養(yǎng)的人胃癌BGC-823細胞增殖和凋亡的影響，從實驗

8、研究方面，進一步探討化濁解毒方藥在防治胃癌前病變中可能的作用機制。
　　 第一部分慢性萎縮性胃炎證候學聚類研究
　　 目的：采用變量聚類分析的方法，對CAG臨床資料進行探索性的中醫(yī)證候分類研究，旨在應用現(xiàn)代數(shù)理統(tǒng)計方法探索CAG較為規(guī)范的臨床證候分型，驗證濁毒證候的特點，為臨床辨證提供客觀依據。
　　 方法：采集河北省中醫(yī)院消化科門診及住院CAG患者，所有患者依照西醫(yī)診斷標準確診為CAG，符合納入、排除標準。記錄

9、371例CAG患者的癥狀、體征、舌象和脈象等臨床資料，使用SAS軟件對56個變量進行3-6類的聚類分析。
　　 小結：應用變量聚類分析，同時結合臨床專家意見，能夠幫助進行CAG中醫(yī)證候的合理分類，并對提出的CAG新的證候類型一濁毒內蘊證進行了較為規(guī)范、科學的驗證，為中醫(yī)辨證論治CAG提供一定較為合理、科學的理論依據。
　　 第二部分慢性萎縮性胃炎濁毒證與胃腸激素相關性研究
　　 目的：本研究旨在通過探討CAG濁毒

10、證與胃腸激素分泌變化規(guī)律相關性研究，以揭示CAG濁毒證患者胃腸激素的分泌特點，提高對濁毒證的認識，為臨床診治提供客觀指標方面的依據。
　　 方法：采集河北省中醫(yī)院2006年12月-2007年12月消化科門診及住院的CAG患者50例，所有患者據符合西醫(yī)診斷標準和中醫(yī)辨證診斷標準，分為濁毒證組25例和脾虛證組25例，同時選取健康志愿者設立健康對照組25例。采用放射免疫法檢測患者血漿胃泌素（Gas）、胃動素（MTL）、生長抑素（SS）

11、的含量。
　　 小結：
　　 1.在CAG濁毒證患者中，血漿Gas、MTL的變化有證型特異性。
　　 2.血漿Gas、MTL的變化可能導致不同證型臨床征象。
　　 第三部分化濁解毒方治療慢性萎縮性胃炎臨床研究
　　 目的：本文旨在通過觀察化濁解毒方對CAG患者的癥狀積分、胃鏡像、病理學、Hp等方面的影響，探討該方治療CAG的臨床療效。
　　 方法：收集河北省中醫(yī)院消化科門診及住院的CAG患

12、者共92例，隨機分為治療組和對照組，治療組口服化濁解毒方治療，1袋/次，2次/日，早、晚空腹溫服。對照組口服中成藥胃復春4片/次，3次/日。12周為1個療程，連用2個療程。
　　 小結：
　　 1.化濁解毒方能夠較好改善CAG患者的臨床癥狀。
　　 2.化濁解毒方對胃黏膜的恢復、腸上皮化生的改善有較好療效。
　　 3.化濁解毒方有一定的抗Hp感染作用。
　　 第四部分化濁解毒方藥及其拆方含藥血清對

13、人胃癌BGC-823細胞增殖和凋亡的影響
　　 目的：本課題旨在通過觀察化濁解毒方藥及其拆方含藥血清對人胃癌BGC-823細胞增殖和凋亡的影響，探討該方藥是否通過抑制細胞增殖作用機制，預防CAG癌前病變，為該方藥臨床應用提供實驗依據。
　　 方法：
　　 1.含藥血清的制備：SD大鼠，雄性，隨機分為4組：空白對照組、化濁解毒方組、化濁方組、解毒方組。實驗組分別按345.9g·kg-1·d-1、208.4g·kg-

14、1·d-1、137.3g·kg-1·d-1。劑量灌胃，空白對照組2ml生理鹽水灌胃，1次/日，共3次。末次給藥后2h，常規(guī)分離血清保存。
　　 2.給藥及分組：分別以各組的含藥血清對胃腺癌BGC-823細胞進行干預，分為空白對照組、化濁解毒方組、化濁方組、解毒方組4組。
　　 3.檢測指標：分別采用MTT、流式細胞術、免疫組化法檢測不同含藥血清對BGC-823細胞的生長抑制、細胞周期和凋亡率的影響及BGC-823細胞中B

15、cl-2、Bax蛋白的表達。
　　 小結：
　　 1.化濁解毒方可抑制人胃腺癌BGC-823細胞增殖，其作用機制可能與其干擾細胞周期，誘導細胞凋亡有關。
　　 2.化濁解毒方及其拆方發(fā)揮誘導凋亡作用的機制可能是通過上調促凋亡蛋白Bax的表達，下調凋亡抑制蛋白Bcl-2的表達來實現(xiàn)的。
　　 3.化濁方、解毒方均能誘導細胞凋亡，而對細胞周期無影響。經兩者配伍后的化濁解毒方不僅能誘導細胞凋亡，而且能將細胞阻滯

16、于G0/G1期，因此其對胃腺癌BGC-823細胞抑制增殖作用明顯增強。
　　 結論：
　　 1.應用變量聚類分析，能夠幫助進行CAG中醫(yī)證候的合理分類，并探討CAG濁毒證證候特點，為中醫(yī)辨證論治CAG提供一定較為合理、科學的理論依據。
　　 2.在CAG濁毒證患者中，血清Gas、MTL的變化有證型特異性。血漿Gas、MTL的變化可能導致不同證型臨床征象。
　　 3.化濁解毒方藥能夠較好的改善CAG患者的臨