巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的作用及機(jī)理探討.pdf

1、目的：
　　 采用骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)的方法，觀察具有溫補(bǔ)腎陽(yáng)作用的單味中藥-巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂，對(duì)去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥的作用，以篩選出對(duì)其具有預(yù)防作用的藥物;并從破骨細(xì)胞分化調(diào)控因子OPG/RANKL和對(duì)骨代謝具有重要調(diào)節(jié)作用的IL-1、IL-6的角度，初步闡明其作用機(jī)理，進(jìn)一步為中醫(yī)藥治療骨質(zhì)疏松癥提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 選用雌性Wistar大鼠83只，隨機(jī)分為3組:空白對(duì)照組12只，假手術(shù)組

2、12只，造模組59只。在術(shù)后1個(gè)月，將造模組大鼠隨機(jī)分為5組，即模型組、陽(yáng)性對(duì)照組、巴戟天組和葫蘆巴組，每組各12只，補(bǔ)骨脂組11只。然后，開(kāi)始灌胃給藥:各中藥組給予濃度為1g生藥/ml的水煎劑，給藥體積為5.6ml/kg體重，即給藥劑量均為5.6g生藥/kg體重;陽(yáng)性對(duì)照組給予0.008mg/ml的己烯雌酚，給藥體積為5.6ml/kg體重。以上給藥1天1次，連續(xù)6天，休息1天后，如此給藥3個(gè)月?？瞻讓?duì)照組、假手術(shù)組、模型組按同法灌服等

3、體積的蒸餾水。
　　 各組大鼠于處死前15天和前3天分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg體重，對(duì)骨進(jìn)行熒光標(biāo)記。給藥結(jié)束后，將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，股動(dòng)脈取血，用于檢測(cè)外周血清中IL-1、IL-6的含量。然后，將各組大鼠處死，取右側(cè)脛骨制作不脫鈣骨切片，用于骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的檢測(cè);取左側(cè)脛骨制作冰凍切片，用于成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKL蛋白表達(dá)的檢測(cè)。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法:實(shí)

4、驗(yàn)結(jié)果皆以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，采用單因素方差分析（ANOVA）進(jìn)行處理，組間兩兩比較，采用q檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的影響。
　　 1.1、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨TBV％的影響。
　　 模型組大鼠脛骨TBV％較假手術(shù)組明顯降低。與模型組比較，巴戟天組、補(bǔ)骨脂組和陽(yáng)性對(duì)照組的大鼠脛骨TBV％顯著增加;而葫蘆巴組則無(wú)

5、顯著性差異。巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨TBV％明顯低于假手術(shù)組;陽(yáng)性對(duì)照組較假手術(shù)組則無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表1。
　　 1.2、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨TRS％的影響。
　　 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠脛骨TRS％明顯增高。巴戟天組、補(bǔ)骨脂組和陽(yáng)性對(duì)照組較模型組大鼠脛骨TRS％明顯降低;葫蘆巴組較模型組無(wú)顯著性變化。巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨TRS％較假手術(shù)組顯著增高;陽(yáng)性對(duì)照組較假手術(shù)

6、組則無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表2。
　　 1.3、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨TFS％和MAR的影響。
　　 模型組大鼠脛骨TFS％和MAR均明顯高于假手術(shù)組。與模型組相比，巴戟天組、補(bǔ)骨脂組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠脛骨TFS％和MAR顯著降低;葫蘆巴組無(wú)顯著性差異。與假手術(shù)組相比，巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨TFS％均顯著增高;陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)明顯差異。巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨MAR高于假手術(shù)組;陽(yáng)性對(duì)照

7、組則無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表3。
　　 1.4、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨mAR和OSW的影響。
　　 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠脛骨mAR顯著升高。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照組大鼠脛骨mAR明顯降低;巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組無(wú)明顯差異。葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨mAR明顯高于假手術(shù)組;巴戟天組和陽(yáng)性對(duì)照組較假手術(shù)組無(wú)顯著性差異。
　　 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠脛骨OSW顯著升高。與模型組相比，陽(yáng)性對(duì)照

8、組大鼠脛骨OSW明顯降低;巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組無(wú)明顯差異。葫蘆巴組OSW明顯高于假手術(shù)組;巴戟天組、補(bǔ)骨脂組和陽(yáng)性對(duì)照組較假手術(shù)組無(wú)顯著性差異。結(jié)果見(jiàn)表4。
　　 2、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨OB和MSC OPG和RANKL蛋白表達(dá)的影響
　　 2.1、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨OB和MSC OPG蛋白表達(dá)的影響。
　　 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG

9、蛋白表達(dá)均明顯下調(diào)。與模型組相比，補(bǔ)骨脂組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG蛋白表達(dá)明顯上調(diào);巴戟天組和葫蘆巴組無(wú)顯著差異。巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組較假手術(shù)組明顯下調(diào);陽(yáng)性對(duì)照組與假手術(shù)組相比，無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表5。
　　 2.2、巴戟天、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠脛骨OB和MSC RANKL蛋白表達(dá)的影響。
　　 模型組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)明顯高于假手術(shù)組。巴戟天組、補(bǔ)骨

10、脂組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)較模型組顯著下調(diào);葫蘆巴組無(wú)顯著性變化。與假手術(shù)組相比，葫蘆巴組大鼠脛骨成骨細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)上調(diào);巴戟天組、葫蘆巴組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)上調(diào);巴戟天組和補(bǔ)骨脂組大鼠脛骨成骨細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)較假手術(shù)組無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照組大鼠脛骨成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL蛋白表達(dá)與假手術(shù)相比，均無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表6。
　　 3、巴戟天

11、、葫蘆巴和補(bǔ)骨脂對(duì)去卵巢大鼠外周血清中IL-1、IL-6含量的影響。
　　 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠外周血清中IL-1含量顯著增高。與模型組相比，補(bǔ)骨脂組和陽(yáng)性對(duì)照組大鼠外周血清中IL-1含量明顯降低;其它各給藥組則無(wú)顯著性變化。巴戟天組、葫蘆巴組以及補(bǔ)骨脂組大鼠外周血清中IL-1含量較假手術(shù)組均顯著升高;陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)明顯差異。
　　 模型組大鼠外周血清中IL-6含量高于假手術(shù)組。與模型組相比，巴戟天組、補(bǔ)骨脂組及陽(yáng)性

12、對(duì)照組大鼠外周血清中IL-6含量較模型組明顯降低;葫蘆巴組則無(wú)顯著性差異。與假手術(shù)組相比，巴戟天組、葫蘆巴組以及補(bǔ)骨脂組大鼠外周血清中IL-6含量明顯增高;陽(yáng)性對(duì)照組無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表7。
　　 結(jié)論：
　　 (1)巴戟天和補(bǔ)骨脂能在一定程度上抑制去除大鼠卵巢所致的骨的高轉(zhuǎn)換，阻止骨量丟失，對(duì)骨質(zhì)疏松癥具有一定的預(yù)防作用;葫蘆巴對(duì)去卵巢所致的大鼠骨質(zhì)疏松癥無(wú)明顯的預(yù)防作用。
　　 (2)補(bǔ)骨脂不僅能夠提高成骨細(xì)

13、胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG的蛋白表達(dá)，而且能抑制其RANKL的蛋白表達(dá);此外，還可降低外周血中IL-1、IL-6的水平，從而達(dá)到對(duì)骨質(zhì)疏松癥的預(yù)防作用。
　　 (3)巴戟天的作用途徑是通過(guò)降低成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞RANKL的蛋白表達(dá)，使之與RANK的結(jié)合減少，進(jìn)而抑制破骨細(xì)胞的分化、成熟及活性，防止骨的過(guò)度吸收，并對(duì)IL-6也有一定的抑制作用。
　　 (4)葫蘆巴對(duì)成骨細(xì)胞和骨髓基質(zhì)細(xì)胞OPG和RANKL的蛋白表達(dá)以及IL