龍眼胚胎發(fā)育相關基因F3H和FRK的克隆與分析.pdf

1、本研究以“立冬本”龍眼合子胚為材料，采用RT-PCR和RACE技術，克隆了龍眼胚胎F3H基因cDNA全長和FRK基因cDNA片段，并對F3H基因進行了原核表達的研究和序列分析，對揭示龍眼胚胎發(fā)育與分化的分子本質，對進一步利用基因工程技術培育優(yōu)質果奠定實驗基礎。主要實驗結果如下： 1采用RT-PCR和RACE技術克隆了龍眼胚胎F3H基因cDNA全長龍眼胚胎F3H基因cDNA全長為1404bp，其中包含119 bp的5'非編碼區(qū)和1

2、87 bp的3'非編碼區(qū)，編碼365個氨基酸，等電點為5.55，分子量為41.112kDa。對龍眼胚胎F3H基因cDNA編碼產(chǎn)物進行分析，推斷龍眼胚胎F3H基因為親水性多肽。將該F3H基因cDNA序列與其它植物F3H基因cDNA進行比較，結果表明，龍眼胚胎F3H基因cDNA序列與許多植物的F3H'基因具有很高的同源性，與棉花F3H的同源性達84％，與柑橘F3H的同源性達82％，與草莓F3H的相似系數(shù)達83％，對其所推導的氨基酸序列進行分

3、析發(fā)現(xiàn)，龍眼F3H的氨基酸序列與棉花F3H同源性最高，達90.76％，與葡萄的同源性達89.04％，與柑橘的同源性達88.49％。該基因在GenBank中登錄號為EF468104。 2龍眼胚胎F3H基因cDNA的原核表達將分離出來的龍眼胚胎F3H基因cDNA的編碼區(qū)序列插入pET-29a載體上構建原核表達載體，在細菌BL21細胞中進行原核表達。試驗結果顯示，該編碼區(qū)片段在原核細胞中不表達。推測是由于表達質粒和表達宿主菌選擇不當，