一株蝗蟲病原菌的分離鑒定及其毒力研究.pdf

1、蝗蟲是一種世界性的害蟲，是農(nóng)作物和其他植物的害蟲，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)構成嚴重的威脅?；认x的防治已成為一項非常緊迫的任務。化學殺蟲劑在大量而長期的使用過程中暴露出了許多缺點：污染環(huán)境，害蟲產(chǎn)生抗藥性，破壞生態(tài)平衡等。作為一種防治農(nóng)林害蟲的新技術手段，微生物農(nóng)藥在世界范圍內(nèi)受到廣泛重視?；认x微孢子蟲(Nosema Iocustae)是我國研究生物防治方法控制蝗害的第一個成功例子。利用昆蟲病源真菌包括白僵菌(Beauveria bassiana)、綠

2、僵菌(Metarhizium anisopliae)、和黃綠僵菌(Maxtrhizium flavoviride)等開發(fā)的真菌滅蝗劑對蝗蟲有較好的防治效果。除此之外，由昆蟲病源細菌類產(chǎn)堿假單孢菌(pseudomonas pseudoalcaligenes)，蠟狀芽孢桿菌(bacillus cereus)等制成的殺蝗劑也有一定的防治效果。但至目前，蝗害未能從根本上得到控制。開發(fā)新的微生物資源，研制成更加有效的殺蝗劑仍舊是微生物農(nóng)藥發(fā)展的一

3、個重要方向。 本文從自然病死全身發(fā)黑蝗蟲蟲尸中成功分離到一株蝗蟲病原菌，命名為hb；用分離菌株純培養(yǎng)物感染健康蝗蟲，回復感染原宿主后的病死蟲病癥與以前相同，并從回復感染致死的蟲尸中重新分離到了相同的病原菌，其致病性為科赫定律所證實；分別用液體石蠟法、甘油速凍保藏法和液氮法保藏分離菌株，供后續(xù)實驗使用。為了對該菌株滅蝗效果作定量檢測，本文作了室內(nèi)毒力測定試驗：用菌株hb發(fā)酵液口服感染健康蝗蟲，記錄死亡情況，觀察病死蟲病癥，并收集具

4、有典型死亡特征的蟲體。對結果進行統(tǒng)計分析，采用統(tǒng)計分析軟件SPSS(V11.0)，以校正死亡率值法求毒力回歸方程，得到毒力回歸方程Y=1.199X-9.745，致死中濃度為LC<,50>=1.33×10<'8>cfu/mL，相關系數(shù)R=0.9158。 通過喂食感染家蠶測定了該菌對鱗翅目昆蟲的殺蟲活性。結果表明，該菌對鱗翅目的昆蟲沒有毒殺作用，可以初步將該目昆蟲列在該菌殺蟲譜之外。 為了初步探討所分離蝗蟲病原菌殺蟲作用機理

5、，本文利用蛋白酶K水解消化蛋白質(zhì)作用，在發(fā)酵菌液上清中加入蛋白酶K使其中酶失活，再噴霧到玉米苗上喂食感染蝗蟲，觀察并記錄死亡情況。試驗結果發(fā)現(xiàn)。蛋白酶K對菌株殺蟲效果有明顯的抑制作用。據(jù)此，可以初步確定殺蟲物質(zhì)是該菌產(chǎn)生的一種胞外蛋白。 為了確定該菌在分類學上的地位，本文對強毒株hb進行了分子生物學鑒定，采用細菌16SrDNA通用引物，用PCR技術擴增出目的片段細菌的保守序列16SrDNA，將目的片段連接到pTA2-T載體上，轉