網(wǎng)狀原角藻(Protoceratium reticulatum)產(chǎn)毒特性及蝦夷扇貝毒素的提取與純化研究.pdf

1、蝦夷扇貝毒素(Yessotoxins, YTXs)是近年來發(fā)現(xiàn)的一類聚醚類海洋生物毒素，主要由甲藻門中的網(wǎng)狀原角藻產(chǎn)生，另外多邊舌甲藻和具刺膝溝藻也被報(bào)道可產(chǎn)此類毒素。此前世界多個(gè)國(guó)家和地區(qū)均有檢出，該毒素不像傳統(tǒng)的腹瀉性貝毒會(huì)引起腹瀉效應(yīng)，但會(huì)對(duì)心、肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)等組織器官造成損傷，是一種對(duì)人類和生態(tài)系統(tǒng)具有潛在危害的脂溶性毒素。2007年，我國(guó)首次檢出了YTX及其衍生物，被我國(guó)逐步認(rèn)識(shí)，并引起重視，對(duì)高純度的YTX的需求愈來愈大。由

2、于高純度的YTX價(jià)格昂貴，限制了其在我國(guó)各個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用。因此，當(dāng)前我國(guó)研究出一種分離純化 YTX的方法顯得很有必要。
　　本文通過實(shí)驗(yàn)室大量培養(yǎng)的網(wǎng)狀原角藻，使用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS/MS)對(duì)其生長(zhǎng)曲線的各個(gè)時(shí)期每個(gè)游動(dòng)細(xì)胞的產(chǎn)毒狀況進(jìn)行定性定量分析；并對(duì) YTX提取的條件進(jìn)行優(yōu)化；以及通過低壓柱層析法分離純化蝦夷扇貝毒素(YTX)，以期得到純度較高的YTX樣品。通過進(jìn)行LC-MS/MS毒素分析，本藻株的游動(dòng)細(xì)胞可產(chǎn)Y

3、TX和少量的Homo-YTX，其中YTX為主要的毒素組分，藻株在一個(gè)生長(zhǎng)周期產(chǎn)YTX為3.9~71 pg cell?1。游動(dòng)細(xì)胞在生長(zhǎng)平臺(tái)期后期產(chǎn)毒最高。通過單因素實(shí)驗(yàn)，對(duì)影響 YTX提取的有機(jī)溶劑濃度和提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到最優(yōu)條件為：提取溶劑甲醇濃度為90％，料液比為1:120；超聲萃取時(shí)間10 min；提取次數(shù)為2次，即可達(dá)到97.7%的提取率。為進(jìn)一步得到Y(jié)TX純化樣品，本研究通過低壓柱層析法分離純化YTX，比較了3種性質(zhì)的氧

4、化鋁純化YTX的效果，以YTX的出峰時(shí)間、回收率和變異系數(shù)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果表明：堿性氧化鋁最好，出峰快、回收率最高，變異系數(shù)最??；C18出峰快，回收率（%）為88.4±4.0，變異系數(shù)為5%；RP-18出峰快，回收率（%）為28.7±3.0，變異系數(shù)為10%。綜上所述，柱層析后的樣品經(jīng) LC-MS/MS分析表明從網(wǎng)狀原角藻中分離純化的 YTX樣品純度為99%。以上工作是國(guó)內(nèi)首次對(duì) YTX分離純化方法進(jìn)行研究，其結(jié)果可以為得到更高純度的Y