RNA干擾her-2基因?qū)侨饬黾?xì)胞血管生成相關(guān)因子VEGF-A、IL-8表達(dá)的影響.pdf

1、目的：初步探討shRNA沉默her-2基因?qū)θ斯侨饬黾?xì)胞株saos-2中血管生成相關(guān)因子VEGF-A和IL-8表達(dá)的影響及意義。
　　方法：構(gòu)建her-2 shRNA重組表達(dá)載體，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)法轉(zhuǎn)染至人骨肉瘤細(xì)胞株saos-2，并經(jīng)G418篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株，同時(shí)設(shè)不轉(zhuǎn)染的空白對(duì)照組和轉(zhuǎn)染陰性載體的shNC組;采用倒置熒光顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)染效果進(jìn)行評(píng)價(jià);采用RT-PCR、Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后her-2

2、mRNA和蛋白表達(dá)水平，評(píng)估抑制效果;RT-PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后VEGF-A和IL-8基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平;ELISA法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF-A和IL-8的蛋白分泌水平。
　　結(jié)果：經(jīng)測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒her-2-shRNA構(gòu)建成功，并成功將her-2-shRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至saos-2細(xì)胞中。構(gòu)建獲得的her-2 shRNA重組質(zhì)粒能顯著抑制her-2基因的表達(dá)，其對(duì)her-2 mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)的抑制率分別為

3、63.05％和62.59％; RT-PCR、ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，相對(duì)于空白對(duì)照組和shNC陰性對(duì)照組，her-2 shRNA組VEGF-A、IL-8基因的mRNA的表達(dá)水平及蛋白分泌水平顯著下調(diào)（P＜0.01）。
　　結(jié)論：her-2-shRNA可顯著下調(diào)her-2基因在人骨肉瘤saos-2細(xì)胞中的表達(dá)水平，并能抑制VEGF-A、IL-8基因mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白分泌水平;her-2基因參與了人骨肉瘤細(xì)胞VEGF-A、IL-8的