體外軟骨細(xì)胞與軟骨單位共培養(yǎng)構(gòu)建軟骨組織工程種子細(xì)胞的最佳比值.pdf

1、目的：利用兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞與軟骨單位建立混合共培養(yǎng)體系，明確體外軟骨細(xì)胞與軟骨單位共培養(yǎng)構(gòu)建軟骨組織工程種子細(xì)胞的最佳比值。
　　方法：將兔膝關(guān)節(jié)軟骨分別用酶消化為軟骨細(xì)胞與軟骨單位后，按一定比例混合配制，分為五組，A組:單純軟骨細(xì)胞組；B組:比值為2:1的軟骨細(xì)胞/軟骨單位組；C組:比值為1:1的軟骨細(xì)胞/軟骨單位組；D組:比值為1:2的軟骨細(xì)胞/軟骨單位組；E:單純軟骨單位組。以2×105個(gè)細(xì)胞/孔接種于放有蓋玻片的六孔板中，使

2、細(xì)胞單層貼壁培養(yǎng)爬片，待細(xì)胞生長(zhǎng)6日爬滿后，進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)：HE、番紅O染色觀察細(xì)胞組織形態(tài)學(xué)的變化，RT-PCR檢測(cè)Agg、II型膠原和I型膠原的基因表達(dá)水平。Elisa檢測(cè)上清液GAG、II型膠原的含量。
　　結(jié)果：共培養(yǎng)組細(xì)胞形態(tài)正常。通過RT-PCR檢測(cè)Agg、II型膠原和I型膠原的基因表達(dá)，Elisa檢測(cè)上清液GAG、II型膠原的含量表明：采用共培養(yǎng)方法的軟骨細(xì)胞與軟骨單位的混合組中細(xì)胞代謝的表達(dá)要明顯高于單純軟骨細(xì)胞組，