rAAV2介導IGF-1基因治療聯(lián)合康復訓練對大鼠脊髓損傷修復作用的研究.pdf

1、研究目的：
　　本實驗對大鼠進行脊髓損傷造模后，應用重組腺相關病毒載體（rAAV2）介導胰島素樣生長因子-1（IGF-1）基因治療和康復訓練聯(lián)合干預。采用運動功能評分、組織學和免疫組化等技術，觀察大鼠脊髓損傷修復過程中不同時間點后肢運動功能、損傷脊髓局部神經元數量、損傷組織IGF-1表達等指標。比較單純基因治療、單純康復訓練和基因治療聯(lián)合康復訓練對脊髓損傷的修復效果，豐富相應研究資料。
　　研究方法：
　　研究對象為9

2、0只雄性SD大鼠，脊髓損傷造模后隨機分為5組：假手術組、自然愈合組、康復訓練組、基因治療組、聯(lián)合治療組（基因治療聯(lián)合康復訓練）；各組再分別設14d組、28d組、42d組（每組6只）。基因治療組造模后24h脊髓注射3ul重組腺相關病毒，康復訓練組造模后7d進行游泳訓練，聯(lián)合治療組同時施加上述兩種治療方法。跟蹤測試各組不同時間點下列指標：脊髓組織形態(tài)變化、IGF-1表達、脊髓前角運動神經元數量，后肢運動功能BBB評分、斜扳試驗評分。其中BB

3、B評分和斜板實驗分別于造模后1d、3d、7d、14d、28d、42d測試，組織學和免疫組化取材時間點為14d、28d、42d游泳訓練后2h。實驗結果采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。
　　研究結果：
　?。?）重組腺相關病毒介導的GFP綠色熒光蛋白能夠在脊髓組織損傷區(qū)域的神經元和神經膠質細胞中廣泛表達，對照組無表達。
　?。?）傷后各組IGF-1表達都顯著高于假手術組（P<0.05）；隨修復時間14d、28d、42

4、d自然愈合組呈下降趨勢，到第42d基本接近正常水平。其余各組表達穩(wěn)定，組內比較無顯著下降；第42d各組IGF-1量由高到低為聯(lián)合治療組、基因治療組、康復訓練組、自然愈合組、假手術組，各組間差異非常顯著（P<0.05）。
　?。?）傷后各組運動神經元數量均非常顯著低于假手術組（P<0.01）；14d、28d、42d各組運動神經元數量無明顯變化，組內比較無顯著差異；第42d運動神經元存活數由高向低為：聯(lián)合治療（68%）、基因治療組（6

5、6%）、康復訓練組（39%）、自然愈合組（17%），除聯(lián)合治療組和基因治療組無顯著差異外，其余各組間差異非常顯著（P<0.01）。
　?。?）各組BBB評分和斜板評分趨勢相同，于造模后降到最低，此后緩慢升高。1d、3d、7d各組間運動評分無顯著差異。第14d和28d，聯(lián)合治療組BBB評分和斜板評分非常顯著高于其余各組（P<0.01）；康復訓練和基因治療組也顯著高于自然愈合組（P<0.01），但兩組間無差異；第42d各組運動評分由高

6、向低為聯(lián)合治療組、康復訓練組、基因治療組、自然愈合組，除康復訓練與基因治療組差異為顯著外（P<0.05），其余各組差異均非常顯著（P<0.01）。
　　研究結論：
　　（1）重組2型腺相關病毒（rAAV2）能夠高效感染脊髓神經組織，并介導外源基因長期穩(wěn)定表達，是脊髓損傷基因治療的理想載體。
　?。?）康復訓練聯(lián)合rAAV2-IGF-1基因治療能夠保護脊髓損傷后運動神經元免于死亡，促進運動功能恢復，其效果優(yōu)于單純的康復訓