高壓氧治療早老性癡呆模型大鼠的實驗研究.pdf

1、目的：驗證大鼠腦海馬區(qū)注射Aβ25-35建立AD模型的可行性和可重復性；觀察高壓氧(hyperbaric oxygen，HBO)療法對AD大鼠行為學的影響；觀察HBO療法對AD大鼠腦海馬區(qū)神經元形態(tài)學的影響；檢測HBO對AD大鼠海馬腦組織內SOD和MDA的影響；檢測HBO對AD大鼠海馬腦組織GFAP表達的影響；檢測HBO對AD大鼠海馬腦組織Bcl-2和Bax mRNA表達的影響。
　　方法：SD大鼠雙側大腦海馬區(qū)分別注射5μl(1

2、μg/μl)Aβ25-35建立AD大鼠模型。實驗動物分為正常對照組、假手術組、模型對照組和HBO組，各組均為12只大鼠。正常對照組不注射任何物質，假手術組大鼠雙側大腦海馬區(qū)注射等量生理鹽水。造模后一周進行Morris水迷宮行為學試驗，記錄平均逃避潛伏期和90s內跨越平臺次數(shù)，用以測量大鼠對水迷宮的學習和記憶獲取能力以及對平臺空間位置的記憶保持能力，從而判斷造模效果。干預方法：2ATA純氧，每天一次，每次吸氧60min，10d一療程，共兩

3、個療程。HBO結束后大鼠進行Morris水迷宮實驗，觀察治療效果。實驗終期處死動物進行大鼠海馬腦組織HE病理學觀察；用羥胺法測定大鼠海馬腦組織SOD活性；用硫代巴比妥酸反應法檢測大鼠海馬腦組織MDA的含量；用免疫組織化學技術檢測各組大鼠海馬腦組織GFAP的表達；用RT-PCR檢測各組大鼠海馬腦組織Bcl-2和Bax mRNA的相對表達量。
　　結果：(一)Morris水迷宮試驗結果
　　造模后Morris水迷宮結果顯示，模型

4、對照組較假手術組和正常對照組平均逃避潛伏期延長，90s內跨越平臺位置次數(shù)明顯減少(P<0.05)，且多圍繞池壁游泳，較少游向原平臺附近，其運動軌跡隨機分布于各象限中。行為學試驗結果提示造模成功。
　　HBO干預后Morris水迷宮結果顯示，HBO組較模型對照組平均逃避潛伏期明顯縮短，90s內跨越平臺次數(shù)明顯增加(P<0.05)，HBO組較假手術組和正常對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。行為學試驗結果提示：HBO治療能改

5、善AD大鼠的學習和記憶能力。
　　(二)大鼠海馬腦組織病理學觀察結果
　　大鼠腦組織HE染色，光鏡觀察顯示，正常對照組及假手術組腦海馬神經元排列整齊，呈圓形或橢圓形，淡紫藍色，著色均勻。模型對照組腦海馬神經元排列紊亂，胞漿濃縮，胞核固縮，呈不規(guī)則齒狀形態(tài)，整個細胞深染成紫色。HBO組腦海馬神經元排列整齊，胞核、核仁清晰，散在分布個別濃染、皺縮的神經元。
　　(三)大鼠海馬腦組織SOD和MDA檢測結果
　　HBO組

6、腦海馬組織SOD活性較模型對照組明顯上升(P<0.05)，而MDA含量則明顯下降(P<0.05)。HBO組與正常對照組及假手術組相比，無顯著性差異(P>0.05)。提示在一定氧分壓范圍內，HBO能夠提高機體自由基清除酶的活力。
　　(四)各組大鼠海馬腦組織GFAP免疫組化結果
　　HBO組較模型對照組相比，GFAP表達下調(P<0.05)，HBO組與正常對照組及假手術組相比，無顯著性差異(P>0.05)。提示HBO能下調AD

7、大鼠海馬腦組織GFAP的表達。
　　(五)各組大鼠海馬腦組織Bcl-2和Bax mRNA相對表達量的結果
　　HBO組Bcl-2 mRNA表達較模型對照組相比顯著上調(P<0.05)，而Bax的mRNA表達則明顯下調(P<0.05)。提示HBO能夠上調AD大鼠的抗凋亡基因的表達，下調凋亡基因的表達。
　　結論：Aβ25-35誘導的AD大鼠模型能夠較好的模擬AD的行為學和病理學改變，是一種較為理想的AD模型，可行性和可重