內耳ENaC和AQPs的表達及醛固酮對ENaC的調節(jié)作用.pdf

1、膜迷路內淋巴為高鉀低鈉的溶液，其離子濃度與細胞內液相似，而外淋巴則為低鉀高鈉的溶液。內、外淋巴的液體成分保持動態(tài)平衡，對于維持內耳的正常功能具有重要的意義。如果內、外淋巴離子失衡，可能造成內耳內環(huán)境紊亂，從而引發(fā)某些內耳疾病，如膜迷路積水，即為內淋巴的分泌過多/吸收障礙所致，也是梅尼埃病(MD)的重要發(fā)病原因。目前對內淋巴K+轉運機制的研究較多，而對Na+和H2O的轉運機制卻知之甚少。 對腎、肺、腦等組織的研究表明，上皮鈉通道(

2、ENaC)是調節(jié)上皮Na+轉運的限速分子，且ENaC的表達受SGK1和Nedd4的調節(jié)，而水通道蛋白(Aquaporin，AQP)則是調節(jié)上皮細胞H2O轉運的重要分子。為探討ENaC和AQP分子在內耳的表達及其調節(jié)機制，本實驗按如下三部分進行研究。第一部分采用免疫組化法，以特異性多克隆抗體定位觀察大鼠和豚鼠內耳組織中ENaC、SGK1和Nedd4異構體蛋白分子的表達，并用αENaC和SGK1的cDNA質粒體外轉錄合成cDNA探針，以原位

3、雜交的方法觀察內耳組織中αENaC和SGK1基因mRNA的表達分布。第二部分以雙側腎上腺切除大鼠為模型，觀察該模型動物的聽功能變化、血管紋超微結構變化，并用Westernblot和RT-PCR方法觀察醛固酮對αENaC和SGK1表達的調節(jié)作用，了解醛固酮與ENaC調節(jié)和內耳功能形態(tài)學問的關系。第三部分用免疫組織化學法觀察內耳組織中AQP1～4亞型分子的表達，為進一步研究其在內淋巴調節(jié)中的作用奠定基礎。 實驗的主要結果如下：1.在

4、豚鼠內耳組織中，ENaC的α、β、γ亞基蛋白和SGK1蛋白表達于除血管紋外的耳蝸組織中，但αENaC在螺旋神經(jīng)節(jié)的表達呈陰性，而Nedd4異構體則表達于包括血管紋的耳蝸各個區(qū)域中。在內淋巴囊上皮細胞和上皮下組織中，ENaC、SGK1、Nedd4都呈陽性表達。αENaCmRNA和SGK1mRNA表達于耳蝸血管紋、螺旋緣、螺旋韌帶下端及內淋巴囊中。 2.在大鼠內耳組織中，ENaC的α、β、γ亞基蛋白和SGK1、Nedd4-1/2異構

5、體蛋白廣泛分布于耳蝸組織中。αENaCmRNA與其蛋白表達模式相近，而SGK1mRNA則表達于除螺旋神經(jīng)節(jié)和Reissner膜外的耳蝸組織中。 3.與正常大鼠相比，雙側腎上腺切除大鼠的聽功能、血管紋超微結構無明顯變化。 4.RT-PCR分析顯示，與正常大鼠相比，ADX大鼠的內耳αENaCmRNA表達顯著下降，而ADX+ALD大鼠則明顯恢復。 5.Westernblot分析顯示，與正常大鼠相比，ADX大鼠的內耳SG

6、K1蛋白表達顯著下降，而ADX+ALD大鼠則明顯恢復至近正常水平。 6.在大鼠和豚鼠耳蝸組織中，AQP1、3、4廣泛表達于各個亞結構中，而AQP2則僅表達于Reissner膜。在豚鼠內淋巴囊中，除AQP2的表達呈陰性外，AQP1、3、4在上皮細胞和上皮下組織中都呈陽性表達。 綜合以上研究結果，可以得出以下結論：1.ENaC、SGK1、Nedd4分子以不同模式表達于不同種屬動物內耳的各個部位，提示這些分子可能形成調節(jié)內淋巴