NOS和VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中的表達.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文NOS和VEGF在卵巢漿液性囊腺癌中的表達姓名：張瑩申請學位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學指導教師：尹菊20040401腺瘤7例，粘液『生囊腺瘤3例)，正常卵巢組織10例。標本經(jīng)甲醛固定后常規(guī)石蠟包埋，4um厚連續(xù)切片。2主要試劑iNOS兔抗^、多克隆抗體、eNOS兔抗人多克隆抗體、vEGF兔抗人多克隆抗體及SABC試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，CD31鼠抗人單克隆抗體購自美國抗體診斷公司。3實驗方法采用卵白素

2、～生物素(SABC)一過氧化酶免疫組織化學染色法。石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，3％過氧化氫滅活內源性酶i0分鐘，高壓修復抗原后滴加正常山羊血清封閉液20分鐘，滴加適當稀釋一抗4攝氏度冰箱過夜，滴加生物素化山羊抗兔IgG20分鐘，滴加SABC20分鐘，DAB顯色，蘇木素輕度復染，常規(guī)脫水、透明、封片。以PBS代替一抗作為陰性對照，以已知陽性表達的腫瘤組織切片作陽性對照。4結果判定iNOS、eNOS及VEGF的判定：陽性細胞(細胞漿或細胞膜呈棕黃

3、或棕褐色者)≥1096的標本則判定為陽性。②~fvD的判定：先在低倍鏡下(100)全面觀察切片，尋找高血管密度區(qū)，然后在高倍視野內(400)計數(shù)微血管的數(shù)目。以與周圍腫瘤細胞和結締組織成分明顯區(qū)別的任何一個棕色著色的內皮細胞或細胞叢作為一個微血管，只要結構不相連，其分枝結構也作為一個血管計數(shù)，記錄5個視野內的微血管數(shù)，取其平均值作為該例組織的MVD值。5統(tǒng)計學處理采用SPSSII0軟件進行分析，對M舊的比較用t檢驗，免疫反應結果之間的關