乙型肝炎致病機制及其核酸疫苗作用機制研究.pdf

1、乙型肝炎病毒在世界范圍內廣泛流行,中國是慢性乙型肝炎高發(fā)地區(qū),每年約有35萬人死于與乙肝相關的疾病(如：肝硬化、肝癌等)。在眾多的乙肝病毒攜帶者中,血清學檢查并沒有轉氨酶的升高,肝臟的病理切片檢查亦無明顯的病理損害,此時機體免疫系統對乙肝病毒在肝細胞內的存在與復制處于一種“容忍”狀態(tài)。因此現在認為乙肝病毒是一種無細胞毒性病毒,只要機體免疫系統不對感染的肝細胞進行攻擊就不會有肝細胞的損害。但在一些對乙肝病毒抗原耐受的轉基因鼠中卻不同比例地

2、發(fā)生了癌變,這說明在免疫系統不參與的情況下,乙肝病毒抗原在宿主細胞內表達與積累也會造成宿主細胞的損害。因此弄清楚在沒有免疫系統參與的情況下乙肝病毒是否對宿主細胞有損害及怎樣的損害,對乙型肝炎預防策略、治療靶點的選擇有重要意義。在我們的研究中對6-8周齡的乙肝轉基因鼠肝臟的蛋白、小分子代謝物利用蛋白質組學、代謝組學技術進行比較。發(fā)現在轉基因鼠中谷胱甘肽過氧化物酶-1(Gpx1)表達下調,而脂肪酸結合蛋白-5(fabp-5),酰基CoA結合

3、蛋白的表達上調。代謝組學研究結果顯示在轉基因鼠肝臟中包括11-脫氫血栓素B2在內盟脂類代謝的中間或最終代謝產物發(fā)生了紊亂。這種整合的“組學”結果表明乙肝抗原的表達與積累能擾亂宿主細胞的脂類代謝并介導了一定程度的氧化應激損傷。 正因為目前缺乏有效的抗病毒治療藥物使得乙型肝炎預防性疫苗顯得格外重要。目前使用的重組蛋白只能夠激起機體有效的體液免疫,而細胞免疫在該疾病的預防與治療過程中又起著非常重要的作用。核酸疫苗是疫苗研制的一種重要形

4、式,具有研發(fā)周期相對短、純化技術相對成熟、可同時誘導體液和細胞免疫的優(yōu)點,被較多地應用當前的傳染病疫苗的研制中。前期的研究表明單次肌肉注射表達表面抗原的質粒能在小鼠體內表達表面抗原,并激起機體較強的免疫保護反應。許多臨床試驗表明核酸疫苗安全性好,不引起系統的毒性反應。但最近也有文獻報道核酸疫苗導致的表面抗原及抗表面抗原抗體在小鼠血清中持續(xù)存在,免疫復合物的形成和沉積,能引起小鼠肝腎功能的損害。另外,一些研究表明核酸疫苗引起的免疫反應很難

5、在大動物或人體內得到重現。因此我們認為對核酸疫苗的免疫保護機制及安全性的了解還很欠缺,很有必要對核酸疫苗進行全面的評估。在我們的研究中利用蛋白質學與代謝組學技術對核酸疫苗、重組蛋白、質粒空載體及PBS免疫小鼠血清中蛋白、小分子代謝物進行比較研究。我們發(fā)現植物鞘氨醇、二氫鞘氨醇、神經酰胺在核酸疫苗免疫小鼠血清中明顯升高。另外,血清中包括載脂蛋白A-I前體在內的眾多蛋白也發(fā)生了變化。這些結果表明核酸疫苗免疫能刺激肝臟的鞘脂合成與代謝,可能會