Celecoxib對宮頸癌細胞增殖、凋亡及其P53表達的影響.pdf

1、研究背景：環(huán)氧化酶(COX)是前列腺素(PGs)合成過程中重要的限速酶，COX有COX—1和COX—2兩種形式，COX—1在人體多數(shù)組織中持續(xù)表達，維持機體正常的生理功能，對于生長因子，細胞因子等刺激COX—1的含量無明顯變化；相反的，COX—2在正常人體絕大多數(shù)組織中無法檢測到，僅在腦、腎和結腸組織中有少量的表達，而在各種細胞因子、生長因子和癌基因的誘導下，COX-2表達量可迅速上升。近年來，許多研究表明，多種腫瘤組織存在COX-2過

2、度表達，COX-2表達上調或活性增加與腫瘤細胞的過度增殖和凋亡耐受存在一定聯(lián)系，因此對COX-2的研究將作為惡性腫瘤防治的一個新靶點。有資料表明，COX-2特異性抑制劑—Celecoxib對許多實體惡性腫瘤具有抑制增殖、誘導凋亡作用。子宮頸癌是一種常見的婦科惡性腫瘤，對宮頸癌的治療，目前以手術結合放化療為主，這對早期宮頸癌可取得較好的療效，但對于Ib期和中晚期宮頸癌的療效并不理想。宮頸癌的化療，在治療晚期或復發(fā)轉移的患者起著重要作用，因

3、此尋找有效的子宮頸癌化療藥物具有重要意義。Hela系宮頸癌細胞株，是體外研究宮頸癌的良好模型。本研究用Celecoxib作用于宮頸癌Hela細胞株，觀察Celecoxib對Hela細胞是否具有抑制增殖和凋亡誘導作用，并對Celecoxib抗宮頸癌作用的分子機制進行初步探討。 目的：觀察Celecoxib是否具有對Hela細胞增殖抑制、凋亡誘導的能力；檢測Celecoxib干預Hela細胞株后COX-2 mRNA和P53mRNA的

4、表達水平的變化。 方法：1用MTT比色法試驗觀察不同濃度的Celecoxib對Hela細胞活力的影響：實驗組設Celecoxib終濃度分別為10μmol／L，20μmol／L，40μmol／L，80μmol／L，對照組加入等體積DMSO，每個濃度均設6個平行孔。酶標儀檢測。計算細胞活力。2用20μmol／L的Celecoxib干預Hela細胞，對照組加等體積DMSO。用Hoechst33258染色鑒定Hela細胞凋亡的形態(tài)學特

5、征。3用流式細胞儀分析Celecoxib作用Hela細胞24小時后的凋亡細胞百分率。4 半定量RT-PCR檢測Celecoxib干預Hela細胞24小時后P53mRNA及COX-2mRNA的表達變化。結果以目的基因與β-actin的積分吸光度的比值表示。 結果：1MTT比色法實驗顯示隨著Celecoxib濃度增高，細胞活力逐漸降低，Hela細胞各試驗處理組細胞活力分別為對照組細胞活力的87％、46.3％、11.4％、6.2％、

6、2％，試驗組與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(F=2251.2，P<0.05)．a Celecoxib抑制Hela細胞活力的IC<,50>為19μmol／L；2 Hoechst33258染色顯示：對照組細胞核大小基本一致，為圓形或橢圓形，數(shù)量多，被染成均勻的淡藍色；在20μmol／L藥物濃度時，可見較多凋亡細胞，胞核明顯縮小，形態(tài)不規(guī)則，大小不一，可見呈碎塊致密濃染，形狀不規(guī)則的細胞碎片(凋亡小體)；3流式細胞儀檢測顯示：經不同濃度的Ce

7、lecoxib(0，10μmol／L、20μmol／L、40μmol／L、80μmol／L)干預24小時后，Hela細胞的早期凋亡率逐漸升高，分別為2.42％，9.56％，21.52％，32.59％，36.34％，試驗組與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(F=187.339，p<0.001)。4半定量RT-PCR檢測結果顯示實驗組和對照組均在346bp處擴增出COX.2 mRNA特異性條帶，在614bp處擴增出P53mRNA特異性條帶，在5

8、50bp處擴增出β-actin特異性條帶。Hela細胞中COX-2mRNA的表達水平隨著Celecoxib劑量的升高而呈現(xiàn)降低的趨勢。試驗組與對照組相比，分別降低了17％、31％、52％、55％，除了40u mol／L與80μmol／L兩組間(P=0.27>0.05)差異沒有統(tǒng)計學意義，其余各組兩組間差異均具有統(tǒng)計學意義。Hela細胞中P53mRNA的表達水平隨著Celecoxib劑量的升高而呈現(xiàn)升高的趨勢，實驗組與對照組相比，分別升高