胃康舒寧誘導胃癌SGC-7901細胞株凋亡機制的研究.pdf

1、　　研究背景
　　胃癌( Gastric Cancer)是東亞國家,包括中國、日本和韓國在內的常見腫瘤,全球胃癌死亡者每年超過 70萬。我國是胃癌的高發(fā)地區(qū),據(jù) 2005 年我國公布的數(shù)據(jù)顯示[1],我國胃癌發(fā)病率在男性中達 37.1/10 萬,女性中為 17.4/10萬,死亡率分別為 15/10 萬和 13.3/10 萬。由此可見胃癌是嚴重危害人類健康的常見腫瘤之一。而臨床大多數(shù)胃癌患者的死因是術后復發(fā)和轉移,所以尋找手術以

2、外的治療胃癌的藥物和方法是目前抗腫瘤研究的一個重要課題。中醫(yī)藥療法是胃癌綜合治療的重要手段之一,中藥對于減輕放化療不良反應、降低手術后復發(fā)率、改善患者的生活質量、延長患者生存期、均有著重要的意義。
　　胃康舒寧方是本課題組在大量臨床臨床腫瘤治療經(jīng)驗中,立足于解毒化濁、補氣養(yǎng)陰為治則,將多法合于一方,總結出來的。該方是針對胃癌和胃癌前病變臨床癥狀治療,以及手術后放化療期間癥狀改善的有效方劑。能在很大程度上改善胃癌患者的生存質量,

3、延長患者的生存期。胃康舒寧雖然臨床治療胃癌效果明顯,但其作用機理仍不明確,還有待進一步研究。
　　目的：
　　通過觀察中藥復方胃康舒寧誘導體外人胃腺癌細胞 SGC-7901 凋亡的情況,并探討其作用機制,為治療胃癌中藥復方的研究提供思路。
　　方法：
　　用MTT法檢測胃康舒寧對胃癌細胞株SGC-7901生長抑制作用；觀察胃癌細胞的光鏡結構和電鏡結構的變化；采用流式細胞儀技術檢測胃康舒寧對胃癌細胞

4、株細胞周期和細胞凋亡的影響,并計算出凋亡率；應用免疫細胞化學方法檢測胃康舒寧對 SGC-7901 細胞株中 Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2、Bid等相關蛋白的影響。
　　結果：
　　1. MTT法顯示胃康舒寧作用人胃腺癌SGC-7901細胞株24h、48h、72h、96h后,與空白對照組相比,均能使細胞株OD值降低,抑制率隨時間增長和濃度增高而增高。
　　2. 光鏡下能直接觀察到

5、胃康舒寧作用胃癌細胞株72h后部分細胞變小、變圓,細胞核變小,包膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細胞貼壁受到影響。
　　3. 電鏡下顯示胃康舒寧能造成細胞核內染色質聚成團塊,核膜完整,細胞內線粒體變小、數(shù)目減少,胞漿內空泡增加,滑面內質網(wǎng)擴張,細胞膜完整有突起。
　　4. 流式細胞儀檢測細胞周期結果顯示：胃康舒寧作用于SGC-7901細胞48h、72h后與空白對照組比較均能使G1/G0期細胞顯著增多(P<0.05),使S、G2

6、/M期細胞較空白對照組顯著減少(P<0.05),G1/G0期細胞數(shù)量與作用時間增長和濃度升高而增加。
　　5. 流式細胞儀檢測細胞凋亡結果顯示：胃康舒寧作用于SGC-7901細胞株48h、72h均能明顯誘導胃癌細胞凋亡(P<0.05),其作用為0.8mg/mL濃度組的作用效果最佳,其次為0.4mg/mL濃度組和0.2mg/mL濃度組。
　　6. 免疫細胞化學檢測相關蛋白表達結果顯示：與空白對照組比較胃康舒寧能顯著增強

7、胃癌細胞株SGC-7901內Bax、Caspase-3、Caspae-9、Bid蛋白的表達(P<0.05),而Bcl-2蛋白的表達顯著減弱(P<0.05)。
　　結論：
　　1. 胃康舒寧能抑制人胃癌細胞 SGC-7901 細胞的體外增殖,其抑制作用呈劑量-時間-效應關系,并能顯著影響人胃腺癌細胞 SGC-7901 細胞的顯微結構和超微結構。
　　2. 胃康舒寧對 SGC-7901細胞周期各時相均有影響,且