IFN-γ協(xié)同TRAIL誘導骨肉瘤細胞凋亡及其分子機制.pdf

1、腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand，TRAIL)是腫瘤壞死因子超家族成員(tumornecrosisfactor，TNF)它選擇性誘導腫瘤細胞凋亡、對正常組織細胞沒有明顯毒副作用的特性使人們對其治療腫瘤的前景寄予厚望[1]。但是，近來文獻報道[2,3]，部分腫瘤對TRAIL不敏感甚至耐受。因此，如何提高TRAIL的抗腫瘤活性、克服TRAIL的

2、耐藥性成為目前TRAIL研究的熱點。我們通過TRAIL與IFN-γ聯(lián)合作用，觀察他們協(xié)同抗腫瘤的作用及對正常成纖維細胞的毒性，初步探討協(xié)同作用的機制，為進一步研究TRAIL耐藥以及逆轉或致敏這種耐藥提供理論基礎。 材料與方法骨肉瘤細胞株(MG-63)由浙江大學腫瘤研究所提供，正常人成纖維細胞(NHF)由浙江大學邵逸夫醫(yī)院中心實驗室保存，DMEM培養(yǎng)液和胰蛋白酶購自吉諾生物公司，新生小牛血清和胎牛血清購自四季青生物公司，人重組可溶

3、性TRAIL購自Bioscience公司，人重組IFN-γ購自上?？寺∩锕?，MTT購自Sigma公司，Trizol為Invitrogen產(chǎn)品，Taq酶、逆轉錄酶(M-MIV)和RNA酶抑制劑均為Promega公司產(chǎn)品，Marker(DL2000)購自Takara公司，AnnexinV試劑盒購自Biovision公司。流式細胞儀(Beckman-Coulter公司)、凝膠成像掃描儀(Bio-RAD公司)、凝膠定量分析軟件Quantit

4、yoneV4.1.0(Bio-RAD公司)、全自動酶標儀(Bio-RAD公司)、PCR熱循環(huán)儀(PerkinElmer)等由邵逸夫醫(yī)院中心實驗室提供，電子顯微鏡(Philips公司)標本的制作和掃描由浙江大學醫(yī)學院電鏡室?guī)椭瓿?。引物由上海生工生物公司合成，引物設計參考文獻[4]。用相差顯微鏡和電鏡觀察MG-63細胞經(jīng)TRAIL、IFN-γ、TRAIL+IFN-γ作用后細胞形態(tài)學的變化；MTT法檢測不同實驗組MG-63細胞和NHF細胞的