苦參素對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察苦參素(oxymatrine,OM)對實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalallergic encephalomyelitis,EAE)大鼠的臨床表現、脊髓病理變化、中樞神經系統(tǒng)(central nervous system,CNS)炎癥浸潤細胞凋亡及凋亡相關蛋白NF-κBp65,Bcl-2,Bax的影響,分析苦參素在EAE防治中的作用及可能的機制,為臨床應用提供實驗依據。
　　 方法：<

2、br>　　 1、實驗動物分組:將40只雌性wistar大鼠隨機分為4組:正常組、模型組、OM小劑量組(OM1,100mg·kg-1)、OM大劑量組(OM2,150mg·kg-1)。
　　 2、模型建立:應用四肢足墊皮內注射豚鼠全脊髓勻漿和完全弗氏佐劑制成的抗原乳劑,并輔以注射濃度為6.0×109個菌體/ml的百日咳疫苗0.1ml,誘導大鼠建立EAE模型。免疫后每日觀察實驗動物的活動情況,記錄發(fā)病動物的體重變化、神經功能評分、潛

3、伏期、發(fā)病率。
　　 3、給藥方式:正常組和模型組自免疫當天起每天一次腹腔注射生理鹽水,連續(xù)注射18天；OM1組自免疫當天起每天一次腹腔注射苦參素注射液(100mg·kg-1),連續(xù)給藥18天；OM2組自免疫當天起每天一次腹腔注射苦參素注射液(150mg·kg-1),連續(xù)給藥18天。
　　 4、組織取材:在第18天大鼠心臟灌流,取脊髓腰膨大置于4％的多聚甲醛中固定,石蠟包埋,切片。
　　 5、指標檢測:HE染色觀

4、察脊髓組織病理學改變,TUNEL法觀察炎癥浸潤細胞的凋亡情況,免疫組織化學方法觀察凋亡相關蛋白NF-κBp65,Bcl-2、Bax的表達。
　　 結果：
　　 1、動物潛伏期、發(fā)病率觀察:正常組無動物發(fā)病,OM1組、OM2組發(fā)病潛伏期較模型組延遲,OM2組發(fā)病潛伏期較OM1組延遲。OM1組、OM2組動物發(fā)病率低于模型組(P>0.05),OM2組動物發(fā)病率低于OM1組發(fā)病率(P>0.05)。
　　 2、體重變化及神

5、經功能評分變化:實驗期間正常組動物體重持續(xù)上升,OM1組、OM2組、模型組三組動物平均體重整體呈下降趨勢,OM1組、OM2組、模型組平均體重變化與正常組相比P<0.05,OM1組、OM2組平均體重變化較模型組小(P<0.05),OM2組平均體重變化較OM1組小(P>0.05)。模型組動物平均神經功能評分高于OM1組和OM2組(P<0.05),OM2組動物平均神經功能評分低于OM1組(P>0.05)。
　　 3、組織病理學觀察:正

6、常組動物脊髓內無炎性細胞浸潤,模型組、OM1組、OM2組動物脊髓內均存在炎性細胞浸潤,OM1組、OM2組脊髓內炎癥浸潤細胞比模型組少,OM2組炎癥浸潤細胞比OM1組少。
　　 4、CNS炎癥浸潤細胞凋亡陽性率比較:模型組、OM1組、OM2組細胞凋亡陽性率均高于正常組(P<0.05),OM1組、OM2組細胞凋亡陽性率高于模型組(P<0.05),OM2組高于OM1組(P<0.05)。
　　 5、NF-κBp65、Bcl-2、

7、Bax表達:OM1組、OM2組NF-κBp65、Bcl-2表達低于模型組(P<0.05),且OM2組低于OM1組(P<0.05)；OM1組、OM2組、模型組Bax表達相差不大(P>0.05)。
　　 結論：
　　 苦參素對大鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎具有明顯的防治作用,其作用機制可能是通過抑制中樞神經系統(tǒng)細胞NF-κBp65、Bcl-2的表達,重新調整Bcl-2、Bax之間的平衡,增加CNS炎癥浸潤細胞的凋亡,減少CNS