雞多趾候選基因的SNPs及表達(dá)差異研究.pdf

1、本文參考人和鼠多趾相關(guān)基因間的相互作用以及多趾同源區(qū)間，將En2、Shh、Lmbr1、Hlxb9和Gli3基因作為雞多趾研究的候選基因，尋找與多趾有關(guān)的SNPs，并檢測(cè)候選基因表達(dá)上的差異，希望揭示候選基因間的相互作用并闡明雞多趾形成的原因。　　SNP搜尋所用實(shí)驗(yàn)材料共6組，有絲羽烏骨雞(五趾)、A系肉雞(四趾)、四趾菊花雞、五趾菊花雞、四趾北京油雞和五趾北京油雞。每組選5個(gè)個(gè)體對(duì)候選基因進(jìn)行PCR后分6組混合回收產(chǎn)物并測(cè)序比對(duì)，在五

2、個(gè)候選基因的外顯子、內(nèi)含子保守區(qū)以及Lmbr1的5'上游區(qū)尋找能嚴(yán)格區(qū)別四趾和五趾表型的SNPs作為趾型相關(guān)SNPs。結(jié)果顯示這五個(gè)候選基因的外顯子相當(dāng)保守，只發(fā)現(xiàn)Lmbr1外顯子16的一處C/T變異和Gli3外顯子15的G/A變異，沒(méi)有造成氨基酸改變，但測(cè)序比對(duì)或SSCP篩查排除了它們與趾型的關(guān)系?！　『蜻x基因的表達(dá)研究采用白萊航(四趾)和絲羽烏骨雞(五趾)的純繁種蛋同批孵化，選擇同期發(fā)育的胚胎分為頭、軀體和肢芽三部分提取RNA。采

3、用RT-PCR法，最早在1d(孵化24小時(shí))檢測(cè)到Gli3、Lmbr1和Shh的表達(dá)，早于胚胎原位雜交最初可以檢測(cè)到的時(shí)間2.5d～3d。在1d～7d的胚胎都檢測(cè)到這三個(gè)基因的表達(dá)，在一些時(shí)期的表達(dá)存在強(qiáng)弱之分，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有和無(wú)的差別?！　〔捎肣-PCR方法檢測(cè)到Gli3、Lmbr1和Shh的表達(dá)量隨時(shí)間而變。絲羽烏骨雞頭部和軀體的Gli3在3d～4d表達(dá)量較高(4d最高，達(dá)7.18倍)，而肢芽Gli3的變化不大(4d最高，為2.15