丙酸睪丸酮對大鼠運動行為及多巴胺轉運體的影響.pdf

1、多巴胺(Dopamine，DA)是中樞神經系統(tǒng)內與神經精神疾病關系密切的一種神經遞質，主要存在于黑質紋狀體系；多巴胺轉運體(Dopamine transporter，DAT)則是位于多巴胺能神經末梢突觸前膜的一種膜蛋白，它特異性的再攝取DA入突觸前末梢，而終止其對突觸后神經元的作用，是反映多巴胺能神經體系功能狀態(tài)的一個重要指標，已廣泛用于神經配基顯像技術，檢測相關疾病腦內是否存在多巴胺能神經體系的障礙。 諸多研究顯示注意缺陷多動

2、障礙(Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder，ADHD)大多在兒童和青少年時期發(fā)病，主要表現(xiàn)為注意力分散、活動過多等癥狀。男性患者明顯多于女性，推測其發(fā)病可能與體內雄激素水平紊亂有關。神經顯像技術檢測發(fā)現(xiàn)，ADHD患者存在腦內DAT結合信號的改變，可能雄激素水平的紊亂改變了腦內DAT的表達。 近年的研究表明，雄性甾類激素(anabolic-androgenic steroids,AAS)

3、可以影響腦內的獎賞系統(tǒng)，對成年大鼠施予雄激素后，以β-CIT配基顯像技術(PET或SPECT)檢測到大鼠腦內存在β-CIT結合信號的變化。B-CIT是目前用于檢測活體腦內DAT常用的配基，然而B-CIT除結合DAT外，還能結合腦內其它單胺能轉運體如5-羥色胺轉運體和去甲腎上腺素轉運體。研究證實腦內大部分區(qū)域都有三種轉運體的交織分布。因而，應用β-CIT配基顯像技術難以判斷DAT在腦內的真實改變。目的：本研究利用開放廣場實驗、免疫組織化學

4、技術以及Western blot方法，觀察丙酸睪丸酮早期處理大鼠行為和黑質-尾殼核DAT免疫反應強度的變化，探討丙酸睪丸酮早期處理對大鼠行為和DAT表達的影響，藉以推測兩者之間的相互關系，以期為ADHD發(fā)病的神經生物學機制提供部分實驗依據(jù)。 方法：選用健康雄性Wistar乳鼠，隨機分為實驗組和對照組，實驗組(testosterone propionate,TP)乳鼠自生后7d至21d，背部皮下注射丙酸睪丸酮(500μg/d)；對

5、照組(vehicle,Veh)乳鼠相同部位注射等體積芝麻油。在生后46d，和47d以開放廣場實驗觀察大鼠運動行為變化，隨后以免疫細胞化學、western blot技術檢測實驗大鼠腦內DAT在腦內的表達改變。 結果：1.開放廣場實驗：在所觀察指標中，丙酸睪丸酮處理組大鼠的水平運動及運動總徑長在8min組和15min組的檢測中其得分或長度較對照組有顯著性差異(p＜0.05)；垂直運動得分在8min組第二天無意義(p＞0.05)，但存

6、在增多的趨勢，在15min組三天都具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)；清潔動作次數(shù)在8min組第一天無顯著差別(p＞0.05)，但存在增多的趨勢，在15min組三天都具有顯著統(tǒng)計學差異(p＜0.01)。此外，在成長期間，各組間體重無明顯差別，但丙酸睪丸酮處理組大鼠在開放廣場實驗觀察中行進路線較對照組復雜，對周圍環(huán)境的警惕性相對增高。 2.免疫組織化學的實驗結果：①DAT(抗DAT單克隆抗體)免疫反應強標記信號主要分布在中腦黑質和尾殼

7、核。早期丙酸睪丸酮處理大鼠可提高DAT在中腦黑質和尾殼核表達強度，通過靜態(tài)灰度值分析發(fā)現(xiàn)：實驗組黑質101.41±4.72，對照組黑質111.01±12.14；實驗組尾殼核102.61±5.73，對照組尾殼核113.68±12.08，丙酸睪丸酮處理組大鼠的DAT灰度值明顯低于對照組(P＜0.01)，在黑質和尾殼核分別降低了9.47％和10.79％。具有統(tǒng)計學意義。②TH免疫組化結果：與對照組相比，實驗組黑質TH陽性神經元數(shù)目無明顯差別(

8、P＞0.05)。黑質和紋狀體TH免疫反應的靜態(tài)灰度值分析結果顯示實驗組的灰度值明顯低于對照組，分別降低了13.46％和14.15％(P＜0.01)，具有統(tǒng)計學意義。 3.Western blot結果： Western blot結果顯示與對照組相比，丙酸睪丸酮處理組各指標與β-actin條帶相對吸光度比值明顯升高。(1)DAT(抗DAT單克隆抗體)與β-actin條帶相對吸光度值的比值在對照組大鼠分別黑質0.7044±0.0734

9、(80kDa)和0.4179±0.041(50kDa)，尾殼核4.2416±0.5436(80kDa)和1.0976±0.3659(50kDa)：丙酸睪丸酮處理組大鼠為：黑質0.9081±0.0199(80kDa)和0.5374±0.0567(50kDa)，尾殼核5.4952±0.6285(80kDa)和1.5117±0.1134(50kDa)。實驗組大鼠80kDa和50kDa處DAT在黑質和尾殼核的相對吸光度比值較對照組升高(P＜0.

10、05)，在黑質增高了28.9％(80kDa)和28.6％(50kDa)，尾殼核增高了29.6％(80kDa)和37.7％(50kDa)，具有統(tǒng)計學意義。(2)DAT(兔抗DAT多克隆抗體)與β-actin條帶相對吸光度值的比值在對照組大鼠分別黑質1.0297±0.4702(80kDa)和0.4377±0.1389(50kDa)，尾殼核0.5227±0.3035(80kDa)和0.2148±0.0898(50kDa)；丙酸睪丸酮處理組大鼠

11、為：黑質2.5606±0.8808(80kDa)和0.7371±0.1302(50kDa)，尾殼核1.1914±0.232(80kDa)和0.4352±0.0938(50kDa)。實驗組大鼠80kDa和50kDa處DAT在黑質和尾殼核的相對吸光度比值較對照組明顯升高(P＜0.05)，具有統(tǒng)計學意義。具有統(tǒng)計學意義。(3)TH與β-actin條帶相對吸光度值的比值在對照組大鼠分別為：黑質1.4604±0.2174、尾殼核2.6931±0.

12、2523；丙酸睪丸酮處理組大鼠為：黑質1.9263±0.1647、尾殼核4.2186±0.3987。實驗組較對照組各個腦區(qū)TH與β-actin的比值增高(P＜0.05)，在黑質和尾殼核分別增高了31.9％和56.7％，具有統(tǒng)計學意義。 結論：1.早期丙酸睪丸酮的處理改變大鼠青春期的運動行為，主要表現(xiàn)為水平運動、垂直運動、總徑長和清潔動作次數(shù)的增多；2.早期丙酸睪丸酮的處理增加大鼠黑質-尾殼核DAT的含量；3.早期丙酸睪丸酮的處理