不同波長(zhǎng)光對(duì)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:長(zhǎng)時(shí)間暴露于強(qiáng)光下可引起視網(wǎng)膜光損傷,尤其是其中藍(lán)光部分。這種光化學(xué)損傷可累及光感受器細(xì)胞和視網(wǎng)膜的色素上皮細(xì)胞(RPE細(xì)胞)。以往的研究多著重于對(duì)光感受器細(xì)胞的研究,而視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞對(duì)維持正常光感受器細(xì)胞的形態(tài)、功能具有重要作用。本文即從此入手,研究不同波長(zhǎng)光照射對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞形態(tài)、功能影響,試從細(xì)胞生物學(xué)水平探討視網(wǎng)膜光損傷的發(fā)病機(jī)制。 方法:酶消化法分離培養(yǎng)人RPE細(xì)胞,通過(guò)生長(zhǎng)曲線的繪制、形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)鑒

2、定、透射電鏡檢查等方法分析RPE細(xì)胞的生物學(xué)特性;將人RPE細(xì)胞置于不同波長(zhǎng)光線下培養(yǎng),通過(guò)MTT法、透射電鏡檢查等研究不同波長(zhǎng)光對(duì)人RPE細(xì)胞體外生長(zhǎng)特性的影響。 結(jié)果: 第一部分: 1、人RPE細(xì)胞的培養(yǎng)和生長(zhǎng)曲線:體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞接種2小時(shí)后細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng),3天后細(xì)胞伸展,10天融合,傳代細(xì)胞在3天左右融合。RPE細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線近“S”形,在傳代后第一天細(xì)胞數(shù)略減少,經(jīng)過(guò)2-3天的潛伏期后進(jìn)入對(duì)數(shù)生

3、長(zhǎng)期,7天后達(dá)到生長(zhǎng)穩(wěn)定的平臺(tái)期。 2、體外培養(yǎng)人的RPE細(xì)胞透射電鏡:超微結(jié)構(gòu)仍保持正常,細(xì)胞核呈橢圓形,核染色質(zhì)均勻,較密集,胞漿細(xì)胞器豐富,有豐富的游離核糖體,線粒體、高爾基復(fù)合體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),色素含量很少,縱切面尚可見(jiàn)細(xì)胞頂端微絨毛、基底膜內(nèi)褶及細(xì)胞間連接復(fù)合體(可能為緊密連接、橋粒、中間連接)等結(jié)構(gòu)。 3、免疫學(xué)鑒定:免疫組織化學(xué)染色觀察傳代培養(yǎng)3-5代的人RPE細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)細(xì)胞角蛋白(AE1/AE3)。

4、 第二部分: 1、不同波長(zhǎng)光對(duì)RPE細(xì)胞活性的影響:各種光照均使RPE細(xì)胞生長(zhǎng)變慢,其中,藍(lán)光下培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)最慢(P<0.05),依次為紅光、白光,但二者之間差異不明顯(P>0.05),對(duì)照組增生最明顯(P<0.05)(F=12.579,P<0.05)。 2、電鏡結(jié)果顯示:紅光、白光組人RPE細(xì)胞與對(duì)照組相比超微結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化,胞漿內(nèi)各種細(xì)胞器數(shù)目較多,結(jié)構(gòu)正常,細(xì)胞核圓形,核染色質(zhì)均勻。但藍(lán)光組與其它各組比較有

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