不同波長(zhǎng)光對(duì)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：長(zhǎng)時(shí)間暴露于強(qiáng)光下可引起視網(wǎng)膜光損傷，尤其是其中藍(lán)光部分。這種光化學(xué)損傷可累及光感受器細(xì)胞和視網(wǎng)膜的色素上皮細(xì)胞(RPE細(xì)胞)。以往的研究多著重于對(duì)光感受器細(xì)胞的研究，而視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞對(duì)維持正常光感受器細(xì)胞的形態(tài)、功能具有重要作用。本文即從此入手，研究不同波長(zhǎng)光照射對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞形態(tài)、功能影響，試從細(xì)胞生物學(xué)水平探討視網(wǎng)膜光損傷的發(fā)病機(jī)制。 方法：酶消化法分離培養(yǎng)人RPE細(xì)胞，通過(guò)生長(zhǎng)曲線的繪制、形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)鑒

2、定、透射電鏡檢查等方法分析RPE細(xì)胞的生物學(xué)特性；將人RPE細(xì)胞置于不同波長(zhǎng)光線下培養(yǎng)，通過(guò)MTT法、透射電鏡檢查等研究不同波長(zhǎng)光對(duì)人RPE細(xì)胞體外生長(zhǎng)特性的影響。 結(jié)果： 第一部分： 1、人RPE細(xì)胞的培養(yǎng)和生長(zhǎng)曲線：體外培養(yǎng)的人RPE細(xì)胞接種2小時(shí)后細(xì)胞開(kāi)始貼壁生長(zhǎng)，3天后細(xì)胞伸展，10天融合，傳代細(xì)胞在3天左右融合。RPE細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線近“S”形，在傳代后第一天細(xì)胞數(shù)略減少，經(jīng)過(guò)2-3天的潛伏期后進(jìn)入對(duì)數(shù)生

3、長(zhǎng)期，7天后達(dá)到生長(zhǎng)穩(wěn)定的平臺(tái)期。 2、體外培養(yǎng)人的RPE細(xì)胞透射電鏡：超微結(jié)構(gòu)仍保持正常，細(xì)胞核呈橢圓形，核染色質(zhì)均勻，較密集，胞漿細(xì)胞器豐富，有豐富的游離核糖體，線粒體、高爾基復(fù)合體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，色素含量很少，縱切面尚可見(jiàn)細(xì)胞頂端微絨毛、基底膜內(nèi)褶及細(xì)胞間連接復(fù)合體(可能為緊密連接、橋粒、中間連接)等結(jié)構(gòu)。 3、免疫學(xué)鑒定：免疫組織化學(xué)染色觀察傳代培養(yǎng)3-5代的人RPE細(xì)胞胞漿內(nèi)表達(dá)細(xì)胞角蛋白(AE1/AE3)。

4、 第二部分： 1、不同波長(zhǎng)光對(duì)RPE細(xì)胞活性的影響：各種光照均使RPE細(xì)胞生長(zhǎng)變慢，其中，藍(lán)光下培養(yǎng)的細(xì)胞生長(zhǎng)最慢(P<0.05)，依次為紅光、白光，但二者之間差異不明顯(P>0.05)，對(duì)照組增生最明顯(P<0.05)(F=12.579，P<0.05)。 2、電鏡結(jié)果顯示：紅光、白光組人RPE細(xì)胞與對(duì)照組相比超微結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化，胞漿內(nèi)各種細(xì)胞器數(shù)目較多，結(jié)構(gòu)正常，細(xì)胞核圓形，核染色質(zhì)均勻。但藍(lán)光組與其它各組比較有