農(nóng)桿菌介導(dǎo)的幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)化唐菖蒲的研究.pdf

1、唐菖蒲是鳶尾科唐菖蒲屬多年生單子葉球根花卉，是世界著名的四大切花之一。唐菖蒲切花生產(chǎn)是我國(guó)花卉產(chǎn)業(yè)的重要組成部分。唐菖蒲切花生產(chǎn)中遇到的一個(gè)主要問(wèn)題是病蟲(chóng)害繁多，尤其是真菌性病害發(fā)病十分嚴(yán)重。　　應(yīng)用抗病品種是病害防治最直接有效的方法，但唐菖蒲抗病種質(zhì)資源匱乏加之常規(guī)育種周期長(zhǎng)，使得抗病品種遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足生產(chǎn)上的需求。隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，運(yùn)用基因工程手段將外源抗病基因?qū)胫参镏校瑸樘戚牌芽共∮N帶來(lái)了新的希望。　　本研究將抗真菌病

2、基因(幾丁質(zhì)酶基因)通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化唐菖蒲。建立了唐菖蒲高頻再生系統(tǒng)和遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)，經(jīng)PCR檢測(cè)得到了PCR陽(yáng)性植株。為培育唐菖蒲抗真菌病新品種奠定了基礎(chǔ)，為單子葉花卉植物遺傳轉(zhuǎn)化提供了理論依據(jù)。研究研究的主要內(nèi)容和結(jié)果如下：　　1.建立了唐菖蒲直接分化再生系統(tǒng)和愈傷組織再生系統(tǒng)：以子球莖為外植體，在MS+NAA0.2mg/L+6BA2.0mg/L+KT0.8mg/L培養(yǎng)基上直接分化不定芽，在MS+IBA0.5mg/L培養(yǎng)基上生根；

3、以幼芽為外植體，在MS+2,4-D4.0mg/L+6BA0.5mg/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織，在MS+NAA0.2mg/L+6BA2.0mg/L+KT0.8mg/L培養(yǎng)基上誘導(dǎo)芽分化，在MS培養(yǎng)基上生根。　　2.確定了抗生素選擇壓力：載體上含有NPTⅡ選擇標(biāo)記基因，使轉(zhuǎn)化植株帶有卡那霉素抗性，研究得到的卡那霉素選擇壓力為110mg/L。　　3.研究了預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、共培養(yǎng)pH值四個(gè)因素對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響：對(duì)于直接分化再