弓形蟲表面抗原SAG3在蟲體入侵及增殖中的作用.pdf

1、剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種呈世界性分布的專性細胞內寄生的機會性致病原蟲，可引起人獸共患的弓形蟲病。正常人感染弓形蟲后多呈無癥狀帶蟲免疫狀態(tài)，但免疫力低下的人群（如腫瘤患者、AIDS病人、器官移植病人等）感染后，可引起嚴重的后果甚至死亡。孕婦感染弓形蟲可通過胎盤垂直傳播，引起早產(chǎn)、流產(chǎn)、死胎或嬰兒發(fā)育畸形等。近年來，隨著腫瘤患者、AIDS病人及寵物飼養(yǎng)愛好者的逐漸增多，弓形蟲的危害也日益突出，但至今仍無治療弓形

2、蟲病的安全有效藥物，因此深入了解其致病機制對于弓形蟲的防治具有重要意義。 弓形蟲致病的首要步驟是對宿主細胞的入侵及在宿主細胞內的快速增殖，但迄今為止，人們對入侵和增殖的機制尚未明了。已有的研究表明弓形蟲SRS（SAG1-related sequence）蛋白超家族在其中起了重要作用，而SAG3是SRS蛋白超家族中非常重要的一員，其在速殖子、緩殖子及子孢子等多個時期均有表達，且具有較低的免疫原性。雖然已有的研究顯示SAG3參與蟲體

3、的入侵及增殖，但是目前關于SAG3的研究極少，其在弓形蟲致病中的作用和地位并不知曉，因此深入研究SAG3的功能將為研究闡明弓形蟲致病機制提供科學資料。 研究目的： 本研究利用RNAi技術，研究弓形蟲SAG3對蟲體入侵和增殖能力的影響，以期能深入了解表面抗原SAG3的功能，為闡明弓形蟲致病機制提供科學資料。 研究內容： 1、弓形蟲SAG3對蟲體入侵的作用：用電穿孔的方法將針對SAG3基因3’-UTR區(qū)的ds

4、RNA轉入弓形蟲速殖子體內，轉染后的蟲體感染Hela細胞，分別于轉染后5min、30min、1h和2h提取細胞蟲體的總RNA，并用半定量RT-PCR方法分析與弓形蟲入侵密切關的MIC2、ROP2和GRA2三個基因的表達量的變化，同時設立無相關對照組（GFP），電轉條件對照組和正常對照組。 2、弓形蟲SAG3對蟲體增殖的作用：用電穿孔的方法將SAG3基因3’-UTR區(qū)和CDS區(qū)的dsRNA轉入弓形蟲速殖子體內，轉染后的弓形蟲感染H

5、ela細胞，分別于轉染后12h、24h和48h提取細胞蟲體的總RNA并用半定量RT-PCR方法分析弓形蟲嘌呤補救合成途徑中AK、HXGPRT兩個關鍵酶基因的表達量的變化，同時設立無相關對照組（GFP），電轉條件對照組和正常對照組。 研究結果： 1)轉染SAG3基因dsRNA的弓形蟲感染Hela細胞后，MIC2、ROP2和GRA2的表達量均低于對照組。 2)轉染SAG3基因dsRNA的弓形蟲感染Hela細胞后，AK