貴州高羊茅內(nèi)生真菌多樣性研究.pdf

1、高羊茅(Festucaarundinace)作為牧草使用時(shí)又稱葦狀羊茅，我國(guó)新疆、東北中部濕潤(rùn)地區(qū)均有栽培，通常具有更為廣泛的適用性，屬優(yōu)良草坪草、牧草草種(牟瓊，2008)。吳佳海等(2006)從收集的野生高羊茅中采用改良混合選擇發(fā)培育出了株高適中、葉色墨綠、分蘗數(shù)多、綠期較長(zhǎng)、抗逆性強(qiáng)、結(jié)實(shí)性佳、穗形緊湊適用于貴州的高羊茅品種黔草1號(hào)，這對(duì)喀斯特地區(qū)的草地建設(shè)、退耕還草、生態(tài)治理以及畜牧業(yè)的生產(chǎn)具有顯著的示范意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

2、　　禾草內(nèi)生真菌(Grass Endophyte)，是指在禾本科草類植物體內(nèi)完成其生活史的部分或全部，但又不引起任何病癥的微生物。禾草內(nèi)生真菌普遍存在于在禾本科各類植株之中(Latch et al.,1989)，它們一方面寄居在禾草的細(xì)胞間隙營(yíng)寄生生活；另一方面又可通過促進(jìn)禾草的生長(zhǎng)、增強(qiáng)禾草抗逆性來與寄生的禾草達(dá)成互惠共生關(guān)系(Li et al.，2007)。目前關(guān)于禾草內(nèi)生真菌的相關(guān)研究主要集中在子囊菌門核菌綱肉座菌目麥角菌科香柱菌

3、屬(Epichlo?)及其無性型(Neotyphodium)之中，其中無性型(Neotyphodium)禾草內(nèi)生真菌因其對(duì)禾草植物廣泛的侵染和特殊的作用，具有較高的科研價(jià)值(南志標(biāo)等，2004)。
　　本研究通過對(duì)采自貴州境內(nèi)，并種植于貴陽(yáng)高羊茅資源圃內(nèi)的高羊茅植株進(jìn)行取樣，利用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行鏡檢觀察，以確定其內(nèi)生真菌侵染情況，同時(shí)借助于組織切片染色技術(shù)研究高羊茅內(nèi)生真菌的分布特點(diǎn)；再通過體外組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)內(nèi)生真菌進(jìn)行分離培養(yǎng)，并

4、對(duì)其進(jìn)行形態(tài)、生理生化以及分子生物學(xué)鑒定，為今后高羊茅內(nèi)生真菌及其宿主關(guān)系、利用內(nèi)生真菌進(jìn)行高羊茅育種的研究提供了重要的理論及技術(shù)依據(jù)。研究取得如下結(jié)果：
　　1.內(nèi)生真菌定殖情況及組織分布特點(diǎn)
　　不同種類的高羊茅各組織內(nèi)生真菌侵染率不同，但在內(nèi)生真菌侵染率上，均呈現(xiàn)出相同的侵染趨勢(shì)，即：種子侵染率>莖節(jié)侵染率>葉鞘侵染率>葉片侵染率，其中種子侵染率約為35％，莖節(jié)侵染率約為21%，葉鞘侵染率約為18%，葉片的侵染率約為7

5、%。在樣品高羊茅的葉片、葉鞘、莖節(jié)之中，被觀測(cè)到內(nèi)生真菌菌絲體普遍為：緊貼著細(xì)胞壁生長(zhǎng)，多數(shù)平行于宿主細(xì)胞的長(zhǎng)軸，偶見單行排列在細(xì)胞間隙中，粗細(xì)比較均勻幾乎沒有分叉，局部偶見彎曲，不穿透宿主細(xì)胞。內(nèi)生真菌在葉片中沿著海綿組織的延長(zhǎng)方向生長(zhǎng)，且多在氣孔附近；在葉片和葉鞘中則較為稀疏，葉鞘中菌絲體沿著葉脈平行的方向排列，縱向生長(zhǎng)；莖節(jié)間菌絲體靠近維管束，呈不規(guī)則的排列，且分布比較密集，常形成致密網(wǎng)狀。
　　2.高羊茅內(nèi)生真菌的分離鑒定

6、
　　采用組織塊分離法確定了高羊茅各組織中內(nèi)生真菌的最佳分離條件，并從3類高羊茅材料的600份組織塊中分離獲得229株內(nèi)生真菌，分離率為38.17%，經(jīng)形態(tài)型合并，最終獲得了18株單一的絲狀真菌，經(jīng)過分子生物學(xué)、形態(tài)學(xué)和生理生化鑒定，這些真菌分屬香柱菌屬、曲霉屬和青霉屬真菌。
　　3.內(nèi)生真菌侵染對(duì)低溫脅迫的抗性
　　通過鏡檢將實(shí)驗(yàn)高羊茅區(qū)分為內(nèi)生真菌侵染(EI)和未被內(nèi)生真菌侵染(EF)的植株分開，并分別收集種子，采