反復降調(diào)節(jié)E2高水平患者的IVF結(jié)局及卵巢microRNA表達圖譜的研究.pdf

1、【背景】
　　基礎(chǔ)E2被視為評價卵巢儲備能力的指標之一，卵巢功能減退早期E2可先于FSH一年表現(xiàn)為水平升高，臨床常被作為預(yù)測控制性超促排卵（COH）中卵巢反應(yīng)的參考。然而在臨床實踐中會遇到一些基礎(chǔ)E2高水平，且經(jīng)反復降調(diào)節(jié)后仍不能達到降調(diào)節(jié)標準的患者。卵巢是人體合成E2的主要器官，卵巢承載著女性生殖內(nèi)分泌的主要器官。而 microRNA（miRNA）作為真核生物體內(nèi)重要的小 RNA調(diào)控分子，廣泛參與女性卵泡生長、發(fā)育成熟、受精、著

2、床及早期胚胎發(fā)育等過程，從而對維持女性正常生育功能起到至關(guān)重要的作用。
　　【目的】
　　對6例基礎(chǔ)雌二醇（E2）高水平且經(jīng)反復降調(diào)后E2不達標患者的臨床資料進行回顧性分析，以探討其病因、治療措施及助孕效果。繪制人類卵巢miRNA的表達圖譜，描繪miRNA在卵巢生理過程，探索miRNA如何參與生物合成及調(diào)控的過程，進而為進一步對miRNA的科學研究及臨床實踐提供參考及思路。
　　【方法】
　?。?）臨床資料的回顧

3、性分析回顧性分析2012年1月至2014年8月間于我生殖醫(yī)學中心行IVF治療患者中基礎(chǔ)E2水平升高的267例患者的IVF臨床資料，其中6例行長效長方案反復降調(diào)節(jié)E2水平難以達到降調(diào)標準。將同期我中心行長方案助孕的患者的臨床結(jié)局進行比較研究。
　?。?）人類卵巢miRNA的實驗研究
　　1）收集正常人的卵巢皮質(zhì)區(qū)組織，并制備皮質(zhì)區(qū)組織細胞小RNA cDNA文庫，利用Illumina測序技術(shù)和CPSS工具對小RNA進行深度測序和

4、數(shù)據(jù)分析。
　　2）繪制卵巢皮質(zhì)區(qū)組織細胞 miRNA的表達圖譜（包括新發(fā)現(xiàn)的miRNA即novel miRNA）。
　　3）利用生物信息學軟件對高表達的前十位miRNA的下游靶基因進行預(yù)測，進而運用Gene Ontology（GO）、Pathway analysis等軟件對其潛在的下游調(diào)控通路進行富集和篩選。
　　4）在預(yù)測和篩選的基礎(chǔ)上，運用實時定量RT-PCR對前十位高表達的miRNA及novel miRNA及其

5、下游靶標進行實驗驗證。
　　【結(jié)果】
　?。?）臨床資料的回顧性分析基礎(chǔ)E2水平升高的267例中6例行長效長方案反復降調(diào)節(jié)E2水平難以達到降調(diào)標準患者，其中4例直接超排者2例獲得臨床妊娠；1例改行微刺激方案者，獲得臨床妊娠；1例改行來曲唑（LE）繼續(xù)治療后行促排治療者，獲得臨床妊娠。261例唯基礎(chǔ) E2高水平且垂體降調(diào)節(jié)達標者的臨床妊娠率為35.29％（78/221），流產(chǎn)率7.69%(6/78)，OHSS發(fā)生率15.33%

6、(40/261)。同期行長方案的患者臨床妊娠率49.72%，流產(chǎn)率9.82%，OHSS發(fā)生率2.79%。
　?。?）人類卵巢miRNA的實驗研究
　　1）深度測序結(jié)果顯示，有762種已知miRNA和492種新發(fā)現(xiàn)的miRNA在正常人卵巢皮質(zhì)區(qū)組織細胞中表達。經(jīng)過qRT-PCR驗證，前10條高表達的miRNA及novel miRNA的相對含量與測序結(jié)果相一致。
　　2）GO和Pathway分析發(fā)現(xiàn)，前10條高表達的miR