“一測多評”法用于梔子金花丸多成分含量測定的可行性研究.pdf

1、中成藥的質量長期以來多以單一指標進行控制，但中藥的多成分、多靶點的作用特點決定了對其進行多指標質量控制的必要性，因此多成分同步測定的質量控制模式應運而生。但商品化對照品的供需矛盾和多指標質量控制所致的高昂的檢測成本限制了該質量評價模式在中藥實際的生產、科研和監(jiān)管領域的推廣和應用。“一測多評”（簡稱為QAMS）的中藥質量評價模式為解決該矛盾提供了新思路。
　　梔子金花丸的功效是清熱瀉火，涼血解毒，可用于口舌生瘡，牙齦腫痛等肺胃實熱癥

2、，是常用的中藥復方制劑?，F(xiàn)行2010年版《中國藥典》一部含量測定項下僅以梔子苷一個指標成分對其進行質量評價?，F(xiàn)將一測多評的質量評價模式應用于梔子金花丸，探索該方法應用于中藥復方的可行性，使多成分質量控制方法用于中成藥質量控制，提高其質量控制水平，進一步保證藥物的安全、有效、可控，并盡量降低檢測成本。
　　一、梔子金花丸中三類成分的含量測定采用HPLC法，建立對梔子金花丸中3種不同類型的10個成分（小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、

3、蘆薈大黃素、漢黃芩素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚，分別用字母A～J代表該10個成分）的含量進行同步測定的方法。采用Syncronis C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，流動相為甲醇-乙腈-0.2％磷酸水，梯度洗脫，流速1mL·min-1，柱溫30℃，分別在同一波長(254nm)和不同波長（228nm、274nm、254nm）處同時檢測。經(jīng)過系統(tǒng)的方法學考察，其精密度、線性、穩(wěn)定性、重復性、加樣回收試驗均符合中藥成分

4、含量測定的要求。實驗結果表明兩種檢測波長模式下該方法分離度好、無雜質干擾、簡便、準確，可用于梔子金花丸中上述10種成分的含量測定。
　　二、梔子金花丸中三類成分QAMS質量評價模式的建立
　　1、采用PDA型檢測器，以大黃素為內參物，通過斜率法，分別于兩種不同檢測波長模式下，即同一波長（254 nm）和不同波長（228 nm、274 nm、254 nm）處檢測，測定了其他9個待測成分小檗堿、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、蘆薈大黃

5、素、漢黃芩素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚與內參物大黃素間的相對校正因子(Relative Correction Factor，RCF)。在254nm波長處檢測時，最終確定的RCF分別為:f254nm小檗堿/大黃素=1.01、f254nm黃芩苷/大黃素=0.427、f254nm漢黃芩苷/大黃素=0.541、f254nm黃芩苷/大黃素=0.887、f254nm蘆薈大黃素/大黃素=1.39、f254nm漢黃芩素/大黃素=0.793、f254n

6、m大黃酸/大黃素=1.22、f254nm大黃酚/大黃素=1.48、f254nm大黃素甲醚/大黃素=1.01。在不同波長處檢測時，最終確定的RCF分別為:f228nm/254nm小檗堿/大黃素=1.31、f274nm/254nm黃芩苷/大黃素=0.989、f274nm/254nm漢黃芩苷/大黃素=1.11、f274nm/254nm黃芩素/大黃素=1.61、f254nm/254nm蘆薈大黃素/大黃素=1.39、f274nm/254nm漢黃芩

7、素/大黃素=1.73、f254nm/254nm大黃酸/大黃素=1.22、f254nm/254nm大黃酚/大黃素=1.48、f254nm/254nm大黃素甲醚/大黃素=1.00。通過對RCF進行重復性和耐用性試驗，證明在確定的色譜條件下，上述RCF可作為一個常數(shù)用于梔子金花丸中小檗堿、黃芩中黃酮類和大黃中游離蒽醌類成分的含量計算。
　　2、本實驗對梔子金花丸中10個待測成分的定位方法—保留時間差（△TR）和相對保留值（RTR），進行

8、了耐用性考察，最終確定了根據(jù)保留時間差并借助化合物的紫外吸收光譜和梔子金花丸“一測多評”特征圖譜進行定位的方法。最終確定的△tR分別為:△tRA/H=-50.35min、△tRB/H=-42.36min、△tRC/H=-34.42min、△tRD/H=-27.75min、△tRE/H=-19.68min、△tRF/H=-17.73min、△tRG/H=-13.05min、△tRI/H=10.34min、△tRJ/H=16.23min。<

9、br>　　3、對9種C18填料色譜柱(Spursil、Welchrom、Syncronis、Luna、Topsil、Diamonsil(Ⅱ)、Accurasil、Xtimate、Kromasil)考察了時間校正法對待測成分色譜峰的定位效果。選擇校正點（n≥2）時，其中之一必須為內參物。在運用該法對待測成分色譜峰定位時，由于10個待測成分為3種不同類型化合物，因此在實際應用時，可根據(jù)現(xiàn)有對照品的情況靈活應用。試驗中發(fā)現(xiàn)，校正點的增加并未使

10、定位結果的準確性得到相應提高，采用大黃素和小檗堿進行二點校正，定位效果較好。在采用該法進行待測成分定位的同時，若結合待測成分的紫外吸收光譜和梔子金花丸的標準圖譜會使定位準確度得以大幅提高。
　　4、將建立的梔子金花丸中生物堿、黃酮、蒽醌3類成分QAMS方法用于梔子金花丸的質量評價，并將QAMS法的計算值和與外標法的測定結果進行比較，二者無顯著性差異，相對誤差＜5％。
　　研究結果表明:“一測多評”質量評價模式可以應用于梔子金