組織工程尿道黏膜體外構建的實驗研究.pdf

1、尿道缺損是泌尿外科臨床常見的疾病，包括先天性尿道下裂、尿道上裂和各種類型的尿道狹窄等。目前臨床上常應用局部陰莖陰囊皮瓣、口腔粘膜上皮、膀胱粘膜上皮、帶蒂睪丸鞘膜等進行尿道上皮替代修復。然而長段的尿道缺損往往由于自體修復材料有限，使其在臨床外科重建中的應用受到限制而無法得到良好的醫(yī)治。組織工程技術的發(fā)展應用，可能最終解決泌尿系組織來源受限的問題，將為泌尿系外科重建提供最佳的修復材料。
　　 本實驗應用兒童包皮表皮細胞作為種子細胞，

2、以鼠尾膠原制成的膠原膜作為支架材料，進行細胞一材料復合物的體外構建、培育，觀察可否培育成尿道上皮組織，希望為組織工程尿道從建提供最佳的替代修復材料。
　　 目的：
　　 探索人體包皮表皮細胞分離培養(yǎng)的最佳方法，為組織工程尿道重建提供種子細胞；探索以包皮表皮細胞為種子細胞，以膠原膜為支架材料體外構建組織工程尿道黏膜的可行性。
　　 方法：
　　 采用機械分離與酶消化法獲得兒童包皮表皮細胞，以免疫組織化學方法

3、進行細胞鑒定。制備膠原膜作為支架材料，以HE染色、免疫組織化學和掃描電鏡進行評價。分離細胞經(jīng)體外原代培養(yǎng)與傳代擴增，將細胞接種于自制膠原膜上，體外聯(lián)合培養(yǎng)72d，通過對復合物的倒置顯微鏡、掃描電鏡、HE染色及角蛋白的免疫組織化學檢測，了解細胞在支架材料上的生長情況。
　　 結果：
　　 1、用胰蛋白酶和中性蛋白酶消化相結合的方法，可分離出較多的表皮細胞，且成纖維細胞污染少。
　　 2、經(jīng)抗人角蛋白為一抗，免疫組織

4、化學染色鑒定，進一步證實所分離的細胞為表皮細胞。
　　 3、以K-SFM作為培養(yǎng)基，細胞生長增殖良好，純度高，無成纖維細胞污染。
　　 4、膠原膜支架上的細胞經(jīng)過體外培養(yǎng)后，細胞可較均勻的分布及吸附在膜表面，并沿基膜排列形成復層樣結構。掃描電鏡顯示細胞-材料復合良好，免疫組織化學檢測支架上的細胞廣譜角蛋白表達陽性，證明上皮細胞分離培養(yǎng)的表皮細胞能在膠原膜上生長。
　　 結論：
　　 該實驗方法獲取的包皮表