青錢柳、黑靈芝、獨角蓮中的活性物質(zhì)對人源宮頸癌HeLa細胞的作用研究.pdf

1、宮頸癌是婦科三大惡性腫瘤之一，在我國的發(fā)病率較高。其治療手段較為單一，且副作用較大，受到一定限制，因此篩選和研究更為有效的天然低毒治療藥物對宮頸癌的治療具有重要意義。青錢柳、靈芝、獨角蓮作為我國名貴中藥材，其有效成分對某些腫瘤的預防和治療具有一定作用，但對宮頸癌是否有治療作用鮮有文獻報道。本文通過研究青錢柳多糖 (polysaccharides isolated from Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljin

2、skjk，PCP)、黑靈芝子實體甾醇(sterol from fruit body ofGanoderma atrum，SGA)、獨角蓮有機溶劑提取物(the solvent extracts of Typhonieum giganteum Engler．，STGE)對人源宮頸癌HeLa細胞的生長作用，探討了其是否有抑制宮頸癌生長的作用及其可能機理，為青錢柳、靈芝和獨角蓮的抑癌作用，及其抑癌的活性成分的研究提供理論參考。 本研究

3、通過采用倒置顯微鏡對PCP、SGA和不同提取方法得到的STGE作用了24 h、48 h的HeLa細胞進行形態(tài)學觀察；用不同濃度的PCP、SGA和不同提取方法得到的STGE分別作用 HeLa 24 h、48 h后，通過四噻唑藍法(MTT法)，檢測PCP、SGA和STGE對HeLa細胞生長的影響；Annexin法檢測PCP、SGA和STGE A對HeLa細胞誘導凋亡的作用；流式細胞儀對PCP、SGA作用后的HeLa細胞進行細胞周期檢測及RT

4、-PCR法檢測PCP、SGA作用后的HeLa細胞p16、p21、cyclinBl、bax、bcl-2 基因表達變化，得出了以下結果： ①在倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，PCP組中的細胞形態(tài)變圓，生長稀疏，隨著作用時間的延長，細胞體積增大；SGA組中的細胞貼壁率差，破碎細胞較多；不同提取方法得到的STGE各組中細胞形態(tài)呈圓形，體積變小，細胞核濃縮，多數(shù)細胞脫落而懸浮于培養(yǎng)基中，隨著作用時間的延長，破碎細胞增多，STGE各組中STGEA對H

5、eLa細胞形態(tài)的影響性較大。 ②濃度為50、100、200、400μg/mL 的 PCP，20、40μg/mL 的SGA和100 mg/mL(生藥濃度) 不同提取方法得到的 STGE 均顯著性抑制 HeLa 細胞的生長(P<0.01)；SGA對HeLa細胞的抑制作用有時間和濃度依賴性。 ③Annexin法檢測表明：PCP和SGA引起HeLa細胞發(fā)生凋亡的作用較弱，但隨著 SGA 作用時間的延長，能微弱的增高細胞的凋亡率與

6、死亡率；STGE A引起 HeLa 細胞發(fā)生凋亡的作用較強，并隨著STGEA作用時間的延長，凋亡晚期細胞增多。 ④流式細胞術檢測表明：PCP作用HeLa細胞24h能夠顯著阻滯細胞于S期，且隨著作用時間的延長，細胞阻滯在S期的比例呈升高趨勢：SGA 能夠阻滯細胞于S期，但作用不明顯。 ⑤用RT-PCR法對 PCP和SGA作用HeLa細胞基因的檢測表明：各組所提取的總RNA均有β-actin、p16、p21、cyclinB1