豬致病性大腸桿菌高密度發(fā)酵條件優(yōu)化的研究.pdf

1、豬致病性大腸桿菌0139血清型是從仔豬小腸分離獲得的一種溶血性革蘭氏陰性小桿菌，臨床上可引起仔豬黃白痢和豬臉部、眼瞼、結(jié)膜、頸部皮下水腫為主要癥狀的仔豬水腫病。該病原引起的疾病發(fā)病率高，死亡率也高，在我國較多的豬場都有發(fā)生，是危害仔豬生產(chǎn)的重要傳染病之一。通過高密度發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)大腸桿菌0139血清型，制成疫苗和進行免疫可能是有效控制本病的主要措施之一。 本研究通過探索高密度大腸桿菌發(fā)酵工藝參數(shù)，旨在提高豬0139血清型致病性大腸

2、桿菌的生產(chǎn)量，縮短生產(chǎn)周期，降低生產(chǎn)成本。本試驗首先測定大腸桿菌發(fā)酵時需求的pH值、相對溶氧量、生物量、氨基氮、還原糖、無機磷。在此基礎(chǔ)上，以10L發(fā)酵罐進行發(fā)酵，通過對溫度、pH值、接種量、溶氧量、轉(zhuǎn)速、培養(yǎng)時間、碳源添加量、氮源添加量、無機鹽添加量等單因子試驗分別進行了優(yōu)化，以發(fā)酵系統(tǒng)的光密度值為指標，評價以上因素對大腸桿菌發(fā)酵影響。利用此優(yōu)化后的條件，結(jié)合適當?shù)难a料和獸醫(yī)藥品GMP生產(chǎn)原則，在200L發(fā)酵罐中進行了發(fā)酵試驗，同時也

3、對發(fā)酵過程中發(fā)酵系統(tǒng)的pH值、溶氧量和菌體密度進行了動態(tài)的測定。 試驗結(jié)果表明：(1)大腸桿菌在37.5℃，pH為7.5，4％的接種量，溶氧量為50％，200r/min的轉(zhuǎn)速以及15g/L的葡萄糖添加量，20g/L的氨基氮添加量，100mmol/L的無機鹽添加量，培養(yǎng)18h后可以得到理想的培養(yǎng)效果。(2)發(fā)酵系統(tǒng)可以維持設(shè)定的p瞄和溶氧量，并可以使菌體密度在發(fā)酵結(jié)束后達到OD<,600>為34.51，相當于菌體濃度為12.94g