滋陰中藥活性成分對帕金森病模型的保護作用和機制研究.pdf

1、帕金森?。≒arkinson'sdisease，PD）是一種多發(fā)于中老年人的慢性神經退行性變性疾病，主要病理特征為中腦黑質致密部多巴胺能神經元選擇性丟失。目前抗PD藥物可以改善癥狀，但是缺乏神經保護或神經修復的活性，而這一特性對疾病修飾（diseasemodifying）作用來說是十分重要的。PD復雜的病理變化需要我們去開發(fā)具有多靶點、可以改變病程的神經保護或神經修復的藥物。近年來有關GDNF、基底核神經肽在PD中的作用備受關注，本課題

2、主要從這兩個方面分別研究了哈巴俄苷、異菝葜皂苷元對PD模型的保護作用。
　　一方面，在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)哈巴俄苷，一種來自于滋陰中藥玄參的環(huán)烯醚萜類小分子化合物，可以預防和逆轉Mpp+引起的原代培養(yǎng)中腦多巴胺能神經元變性，并證實這種作用與上調模型組膠質細胞源神經營養(yǎng)因子(GDNF)mRNA、蛋白水平有關。本課題在此基礎上，進一步在體內動物模型（慢性MPTP損傷小鼠模型）上對哈巴俄苷的藥效進行了驗證。我們發(fā)現(xiàn)，連續(xù)60天灌胃給予哈

3、巴俄苷(2，6，18mg/kg/d)可劑量依賴性地改善模型小鼠的運動功能（Rotarod行為學測試）、增加中腦黑質致密部酪氨酸羥化酶陽性(TH+)神經元數(shù)目（免疫組化和無偏差立體計數(shù)）、提高紋狀體多巴胺轉運體(DAT)密度（125I-FP-CIT放射自顯影測定）。在機制研究中，我們發(fā)現(xiàn)哈巴俄苷不能抑制單胺氧化酶-B(MAO-B)的活力，但是它可以提高模型小鼠紋狀體內GDNF蛋白水平、可以使模型小鼠紋狀體內異常表達的3種神經肽前體(PDY

4、N，PPT-1，PENK)的蛋白水平正?；?。
　　另一方面，大量體內外實驗已經證實異菝葜皂苷元(smilagenin，SMI)，一種從滋陰中藥知母中提取的小分子化合物，可以經多種機制如提高GDNF表達，對PD模型發(fā)揮神經保護作用，但是關于它能否調控基底核回路中神經肽的表達仍未知。首先，我們在慢性MPTP損傷小鼠模型上觀察了SMI對紋狀體內神經肽表達的影響。實驗初我們用Rotarod行為學測試、TH+神經元染色驗證了模型制作的成功以

5、及SMI的保護作用。ELISA、實時定量RT-PCR數(shù)據(jù)顯示，SMI可以改善模型小鼠紋狀體內PDYN，PPT-1，PENK的蛋白和mRNA的異常表達，使3者蛋白水平回歸正常。其次，我們建立了體外腦片培養(yǎng)模型來進一步探索相關調控機制。在腦片模型中，Mpp+均可引起腦片中3種神經肽前體蛋白水平的降低，而給予SMI預保護可以顯著改善PPT-1蛋白的表達，并且這一作用不受DA受體阻斷劑的影響。
　　綜上所述，我們證實了哈巴俄苷在PD動物模