siRNA干擾人肝癌細(xì)胞株HepG2生存素表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本研究分為三個(gè)部分： 第一部分肝癌組織中survivin蛋白、PCNA的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系 目的：探討人肝癌組織中survivin蛋白及增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系。 方法：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色方法對(duì)46例原發(fā)性肝癌組織中survivin蛋白與PCNA的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并結(jié)合臨床預(yù)后進(jìn)行分析。 結(jié)論：survivin蛋白對(duì)促進(jìn)肝癌細(xì)胞快速增殖具有重要作用，survivin蛋白的表達(dá)

2、情況可以作為判斷肝癌病人預(yù)后的重要指標(biāo)。 第二部分RNA干擾對(duì)肝癌細(xì)胞survivin基因表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響 目的：探討將survivin基因特異性小干擾性RaNA(small interfering RNA，siRNA)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞hepG2對(duì)survivin基因表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響。 方法：將體外合成的survivin特異性的siRNA序列1、序列2和對(duì)照序列，通過(guò)Lipofectamin2000分組轉(zhuǎn)染肝

3、癌細(xì)胞hepG2，應(yīng)用RT-PCR及Westcrn印跡方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞survivin mRNA和蛋白的變化，應(yīng)用MTT法及流式細(xì)胞技術(shù)評(píng)價(jià)其對(duì)體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 結(jié)論：Survivin基因特異性siRNA轉(zhuǎn)染hepG2細(xì)胞可抑制survivin mRNA和survivin蛋白的表達(dá)，并可體外抑制肝癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 第三部分：RNA干擾Survivin基因聯(lián)合順鉑對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞凋

4、亡的影響 目的：探討將survivin基因特異性小干擾性RNA(small interfering RNA，siRNA)轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞hepG2同時(shí)聯(lián)合應(yīng)用順鉑對(duì)survivin基因表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響。 方法：將體外合成的survivin特異性的siRNA序列和對(duì)照序列，通過(guò)Lipofectamin2000分組轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞hepG2，24小時(shí)后再加入順鉑。應(yīng)用RT-PCR及Westem印跡方法檢測(cè)肝癌細(xì)胞survivin