紅松多酚分離鑒定及抗氧化抗癌功能研究.pdf

1、紅松（Pinus koraiensis）又名果松，屬于松科植物。主要分布于我國(guó)東北長(zhǎng)白山到小興安嶺一帶。紅松樹(shù)皮中含有大量的多酚類物質(zhì)，它具有抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫系統(tǒng)活性等作用。因此，從紅松中篩選和評(píng)價(jià)具有強(qiáng)抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫的活性組分具有一定的重要意義。本文選取紅松樹(shù)皮為實(shí)驗(yàn)原料，系統(tǒng)的研究了松多酚提取、純化工藝，并確定40％乙醇洗脫物(PKB)為研究對(duì)象，對(duì)PKB的主要成分進(jìn)行了結(jié)構(gòu)鑒定。分析了PKB的體外、體內(nèi)抗氧化活性，增

2、強(qiáng)小鼠免疫系統(tǒng)活性和抗癌活性，并對(duì)抗氧化活性與抗癌細(xì)胞增殖活性、增強(qiáng)免疫功能與抗癌細(xì)胞增殖活性進(jìn)行了相關(guān)性分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PKB具有較強(qiáng)的抗氧化、抗癌細(xì)胞增殖活性和增強(qiáng)小鼠免疫系統(tǒng)活性，抗氧化活性與抗癌細(xì)胞增殖，增強(qiáng)免疫功能與抗癌細(xì)胞增殖活性具有良好的相關(guān)性。主要研究結(jié)果如下:
　　采用酶解預(yù)處理結(jié)合乙醇浸提法提取紅松樹(shù)皮多酚化合物。以多酚得率為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)曲面法對(duì)紅松樹(shù)皮多酚的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，確定最優(yōu)

3、提取工藝為:加酶量126.1U/g，酶解時(shí)間2.68h，酶解溫度55.4℃，乙醇添加量48.2％。在該最優(yōu)提取條件下多酚得率的高達(dá)12.11 mg/g，與超聲波法提取法相比多酚得率提高了46.95％。
　　對(duì)紅松樹(shù)皮多酚的分離純化條件進(jìn)行研究，考察了六種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)紅松樹(shù)皮多酚靜態(tài)、動(dòng)態(tài)吸附解吸效果，從兩個(gè)方面進(jìn)行考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)D101大孔樹(shù)脂具備較好的吸附和解吸紅松多酚的性能，最終選取D101為純化樹(shù)脂。其最優(yōu)條件為:上樣液濃

4、度為2.5mg/mL，上柱液pH值為3.0，洗脫劑乙醇的最佳解吸濃度為70％;解吸過(guò)程中，洗脫劑用量為4BV;吸附分離后的多酚得率由原來(lái)的12.03％提高到59.9％，純化效果較好。將松多酚粗提物用大孔吸附樹(shù)脂D101進(jìn)行純化，分別用20％、40％、60％、80％濃度的乙醇梯度洗脫，選取40％乙醇洗脫物為研究對(duì)象，用半制備液相色譜儀進(jìn)行二級(jí)純化并收集樣品，采用紫外光譜儀、紅外光譜儀、質(zhì)譜儀、核磁共振對(duì)其進(jìn)行分析和結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)40％

5、乙醇洗脫物主要成分為五羥基二氫黃酮。收集40％乙醇洗脫物中間四分之一段，樣品中五羥基二氫黃酮含量達(dá)到50％，命名為PKB。
　　系統(tǒng)的研究了PKB的體外抗氧化能力和體內(nèi)抗氧化能力。在體外抗氧化能力研究中，分別考察了DPPH自由基、ABTS自由基、羥自由基、超氧自由基的清除能力和總還原能力，并與Vc標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)比，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PKB具有良好的抗氧化效果。在體內(nèi)抗氧化能力研究中，構(gòu)建輻射誘導(dǎo)的氧化損傷模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，PKB各劑量

6、組可明顯減少小鼠各臟器中丙二醛(MDA)含量，提高過(guò)氧化氫酶(CAT)活性、乳酸脫氫酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽過(guò)氧化物(GSH-Px)活性和增加還原型谷胱甘肽(GSH)的含量。能夠有效的抑制氧化酶系，激活抗氧化酶系，保護(hù)細(xì)胞膜的損傷。
　　研究表明PKB可增強(qiáng)小鼠免疫系統(tǒng)活性，結(jié)果顯示，PKB可以有效改善輻射后小鼠生存狀態(tài)，提高小鼠免疫調(diào)節(jié)器官脾臟、胸腺指數(shù)，增加單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力。細(xì)胞周期分布顯

7、示與模型組比較，PKB加藥組使阻滯于G1期的細(xì)胞減少而S期和G2期細(xì)胞增多，呈極顯著性差異(p＜0.01)，細(xì)胞增殖能力得到恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PKB可有效保護(hù)小鼠免疫系統(tǒng)，降低了輻射帶來(lái)的機(jī)體免疫抑制。
　　研究了PKB對(duì)MFC-7、BGC-823、Hela以及HT-29癌細(xì)胞的增殖抑制活性，結(jié)果顯示，PKB對(duì)HT29癌細(xì)胞的抑制活性最強(qiáng)。通過(guò)透射電鏡和掃描電鏡對(duì)凋亡細(xì)胞進(jìn)行觀察。采用瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證PKB可以使細(xì)胞膜損傷產(chǎn)生