Th3在IgA腎病中的作用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　探討獲得性調(diào)節(jié)性Th3細(xì)胞在IgA腎病中的作用及機(jī)制，為IgA腎病臨床治療策略提供新的思路及理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，將等體積均勻懸浮的DAKIKI B淋巴細(xì)胞接種于培養(yǎng)板，設(shè)陰性對(duì)照組（不加任何刺激因子）、實(shí)驗(yàn)組(分別加5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、30ng/ml不同濃度的TGF-β1)、陽(yáng)性對(duì)照組(加濃度為10ng/ml IL-4)，分組培養(yǎng)3天、7天。采用ELISA

2、雙抗體夾心法檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IgA1濃度、IgA1低糖基化程度及IgA1唾液酸化程度;采用Real time-PCR技術(shù)檢測(cè)各組B淋巴細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)(12h，72h) C1β3Gal-T半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和分子伴侶ComscmRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)細(xì)胞上清IgA1濃度測(cè)定:ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示:TGF-β1對(duì)B淋巴細(xì)胞分泌IgA1成雙向調(diào)節(jié)，在低濃度時(shí)(0-10ng/ml)呈正相關(guān)性，在高濃度(10

3、-30ng/ml)呈負(fù)相關(guān)性，3、7天空白組VS各實(shí)驗(yàn)組及IL-4組，均P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2) IgA1低糖基化程度測(cè)定:一定濃度的TGF-β1及IL-4均會(huì)促進(jìn)B淋巴細(xì)胞分泌低糖基化的IgA1增多，3、7天空白組VS各實(shí)驗(yàn)組及IL-4組，均P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3) C1β3Gal-T半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和Cosmc分子伴侶mRNA水平測(cè)定:Realtime-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:一定濃度的TGF-

4、β1下調(diào)影響IgA1正常糖基化的C1β3Gal-T半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和Cosmc分子伴侶兩基因mRNA的表達(dá)，12、72小時(shí)各組細(xì)胞C1β3Gal-T半乳糖基轉(zhuǎn)移酶和Cosmc分子伴侶兩基因的表達(dá)相對(duì)定量，空白組VS各實(shí)驗(yàn)組及IL-4組，均P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而各實(shí)驗(yàn)組、IL-4兩兩比較，均P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　一定濃度的Th3類(lèi)細(xì)胞因子TGF-β1可促進(jìn)人B淋巴細(xì)胞分泌IgA1，并影響IgA1糖