化療藥物篩選膀胱癌干細胞的初步研究.pdf

1、化療藥物篩選膀胱癌干細胞的初步研究Preliminaryresearchonchemotherapyagentstingbladdercancerstemcells院系：華山醫(yī)院專業(yè)：外科學（泌尿外專業(yè)臨床技能型)姓名：黎力平指導教師：王翔教授導師組成員：丁強教授方祖軍教授瞿連喜副教授化療藥物篩選膀胱癌干細胞的初步研究中文摘要目的：膀胱泌尿上皮癌是泌尿系統(tǒng)的最常見的腫瘤而且預(yù)后不良。目前膀胱癌的治療效果并不能令人滿意。早在1977年就有

2、學者提出了腫瘤干細胞（CSCs)的假設(shè)。該假設(shè)認為腫瘤組織中的腫瘤干細胞是腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)的根源。最近十余年時間里，已經(jīng)從實驗室成功分離鑒定了急性髓性白血病的腫瘤干細胞。雖然7至9種人類CSCs己被成功分離鑒定，但其余大部分CSCs還未被分離鑒定，包括膀胱癌腫瘤干細胞。分離腫瘤干細胞的常用方法有3種。第一種也是最常見的方法是利用干細胞表面標志物，應(yīng)用流式細胞技術(shù)進行細胞篩選；第二種是利用普通干細胞的培養(yǎng)基即無血清培養(yǎng)基的方法分選；最

3、后一種則利用側(cè)群細胞（SP)具有一定干細胞特性，應(yīng)用流式細胞技術(shù)分離SP細胞作為腫瘤干細胞。但是以上3中方法因為各自原因都無法成功分離膀胱癌腫瘤干細胞。最近有報道使用化療藥物在動物體內(nèi)成功分選肝細胞癌腫瘤干細胞。因此，本研究基于該研究方法嘗試利用化療藥物體外初步分選膀胱癌腫瘤干細胞，驗證該方法的可行性。方法：使用絲裂霉素C按一定的濃度梯度持續(xù)24小時作用于膀胱泌尿上皮癌T24細胞系。使用WST8細胞增殖與細胞毒性檢測試劑檢測藥物對細胞的

4、抑制率。獲取剩余的耐藥細胞進行下一部分實驗。根據(jù)抑制率實驗的結(jié)果設(shè)計絲裂霉素C的濃度為：0.03mgml，0.5mgml2mgml并分別作為實驗組B、C及D組。使用對照組細胞作為A組。使用流式細胞儀檢測實驗組及對照組細胞的細胞周期。使用實時熒光定量PCR及免疫印跡法分別檢測實驗組及對照組細胞中OCT4及NAN0G的表達。結(jié)果：細胞抑制率實驗顯示抑制率有濃度依賴性，隨絲裂霉素C濃度的上升呈遞增的趨勢。最大及最小抑制率分別為92.5%1.0

5、及64.1%1.4P0.001)。在最高藥物濃度的作用下只有7.5%的細胞存活。流式細胞儀細胞周期檢測顯示對照組及實驗組D組中分別有24.00%及83.99%細胞位于G。G期，15.33%及63.24%的細胞位于S期（^0.05)。相對于對照組，在實驗組的細胞中兩種重要的干細胞標志物OCT4及NAN0G在蛋白及基因水平明顯增高，并與絲裂霉素C的作用濃度呈濃度梯度。結(jié)論：使用絲裂霉素C作用24小時后，剩余的膀胱泌尿上皮癌細胞呈現(xiàn)出干細胞的