樹突狀細(xì)胞在癲癎腦內(nèi)的分布與來源研究.pdf

1、目的：癲癎是一組由不同病因所引起的腦部神經(jīng)元高度同步化，且常具有自限性的異常放電所致的，以發(fā)作性、短暫性、重復(fù)性及通常為刻板性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的綜合征。近期研究表明免疫機制廣泛參與了癲癎發(fā)生及難治性癲癎形成過程。樹突狀細(xì)胞（Dendritic cells,DCs）是機體功能最強的專職抗原遞呈細(xì)胞(Antigen presenting cells,APC)，對免疫反應(yīng)的發(fā)展發(fā)揮重要作用。近期研究表明，在腦損傷后的炎癥反應(yīng)以及神

2、經(jīng)退行性病變中，樹突狀細(xì)胞可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)聚集，并參與腦內(nèi)的免疫反應(yīng)。目前尚未見樹突狀細(xì)胞與癲癎相關(guān)研究報道。因此，本課題以樹突狀細(xì)胞為切入點，觀察癲癎患者及氯化鋰－匹魯卡品致癎大鼠腦內(nèi)樹突狀細(xì)胞的分布。
　　方法：
　　1、選用2010年4月至10月我院神經(jīng)外科手術(shù)切除癲癎6例患者（全面性發(fā)作5例，部分性發(fā)作1例）腦組織，使用CD11c（樹突狀細(xì)胞標(biāo)志物）抗體進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測癲癎患者腦內(nèi)樹突狀細(xì)胞。
　　

3、2、選用氯化鋰－匹魯卡品誘導(dǎo)大鼠癲癎發(fā)作模型，將成年雄性SD大鼠在癲癎發(fā)作后12h，1d、3d、5d、7d、12d、30d處死，使用OX62（樹突狀細(xì)胞表面標(biāo)志物），進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測致癎大鼠腦內(nèi)樹突狀細(xì)胞時間、空間變化。免疫熒光雙標(biāo)法檢測小膠質(zhì)細(xì)胞與樹突狀細(xì)胞。
　　3、使用60Co射線對大鼠照射，破壞外周DCs來源，即殺滅骨髓及外周血液內(nèi)具有分化為樹突狀細(xì)胞能力的造血干細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，3天后，尾靜脈血涂片MGG染色觀察

4、外周血液淋巴細(xì)胞數(shù)目，建立氯化鋰－匹魯卡品誘導(dǎo)大鼠癲癎，選取SE后1、3天時間點，使用OX62，進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，檢測致癎大鼠腦內(nèi)樹突狀細(xì)胞。
　　結(jié)果：
　　1、在6例癲癎患者手術(shù)切除腦組織標(biāo)本中，3例患者的海馬及顳葉皮質(zhì)中發(fā)現(xiàn)CD11c陽性樹突狀細(xì)胞，胞體呈圓形，表面有2－3個突起，散在分布于腦實質(zhì)。
　　2、正常大鼠腦內(nèi)未見明顯OX62陽性樹突狀細(xì)胞表達(dá)。癲癎發(fā)作后1天，樹突狀細(xì)胞開始浸潤腦組織，樹突狀細(xì)胞數(shù)

5、量在3-5天達(dá)到高峰，12h、7天、30天均未見樹突狀細(xì)胞表達(dá)。樹突狀細(xì)胞主要分布于致癎大鼠顳葉皮質(zhì)及丘腦部位(包括丘腦外側(cè)背核、中內(nèi)外側(cè)核、丘腦前背側(cè)核、丘腦外側(cè)后核、丘腦后核)。免疫熒雙標(biāo)法檢測致癎大鼠顳葉皮質(zhì)及丘腦部位未見小膠質(zhì)細(xì)胞與OX62陽性樹突狀細(xì)胞雙標(biāo)。
　　3、大鼠照射60Co后，尾靜脈血涂片MGG染色顯示，與對照組相比，60Co照射組大鼠外周血內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)目顯著減少，建立氯化鋰－匹魯卡品癲癎模型后1、3天，大鼠腦