腫瘤壞死因子-a與糖尿病心肌病關系的實驗研究.pdf

1、目的:通過建立糖尿病模型,觀察糖尿病心肌的病理及超微結構改變,并測定心肌腫瘤壞死因子(TNF-a)的表達,探討TNF-a在糖尿病心肌病發(fā)生發(fā)展中的炎癥機制.方法:Wistar大鼠30只,隨機分成2組,標準喂養(yǎng)1周適應后,均測體重、尿糖、尾靜脈取血測血糖(BG)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等,然后禁食12小時,實驗組大鼠20只給予1％的鏈脲佐菌素(STZ)溶液(6

2、0mg/Kg體重)單次腹腔注射,對照組10只僅給予等量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射.72小時后各組大鼠再次測體重、尿糖、尾靜脈取血測血BG、BUN、Cr、TG、TC等,實驗組凡是體重下降,血BG大于16.7mmol/L,尿糖+++-++++的大鼠,并且能維持1周,說明DM模型復制成功,否則剔除.共成模型1 4只.對照組無異常改變.兩組繼續(xù)標準喂養(yǎng)8周,然后測體重,腹腔麻醉,開胸手術,右心室穿刺取血2ml,測BG、TG、TC、LDL-

3、C、HDL-C等,并迅速剪下心臟,稱心肌重量(CW),計算心重指數(shù)(CI=CW/BW),再快速切取左心室心肌,一份切成3mm的薄片,放置在4％的甲醛溶液中固定,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片,HE染色,光鏡下觀察心肌病理變化,同時免疫組化測定TNF-a表達,另一份切成1 mm<'3>大小的組織塊,放置在3.5％的戊二醛溶液中前固定,1％鋨酸后固定,常規(guī)丙酮酸梯度脫水,環(huán)氧樹脂(EPON) 812包埋,制作超薄切片,鉛鈾染色,然后電鏡下觀察心肌超